号称最难养的干细胞，被研一师弟走捷径拿下？（附手册、视频教学）

又到了一周一次的组会。最近进入春天了，实验室的温度适中，细胞们都长得不错，组里做细胞实验的同学基本都拿到了好看的结果。除了......

小师妹

我的干细胞复苏不出来啊！上周小导也帮我做了一批，没成想也「栽了」。这周只能汇报小鼠预试验了。

你想做机制，还是绕不开 iPSCs 的，你们两个都做不出，可能是重编试剂盒有问题吧～

大师姐

小师弟

我最近手里有一些 PBMC 样本，重编程和培养都做完了，状态还不错

小师妹

你肯定有啥 buff 傍身，快告诉我～

小师弟

都是从这个干细胞实验手册里面看的，包含了重编程、培养、转染、基因组编辑等多个操作步骤，跟着做就成。

扫码下载干细胞实验手册

培养 so easy

手册内容抢先看

part-1如何重编程得到 iPSC？

小师弟：我分享几个《多能干细胞实验方案手册》中提到的建议吧：

● 用于重编程的亲代成纤维细胞应是生长正常且核型正常的早期传代细胞（< p6）。

● 在重编程前，成纤维细胞的接种密度对获得良好重编程效率至关重要。在转染或转导当天，细胞融合度应在 50%～80% 之间。

● 实验方案选用 6 孔培养板的重编程体系。实验方案也可选用 12 孔或 24 孔培养皿，但实验效率可能会受到影响。

综上所述，提高 iPSC 重编程效率是一个涉及多个环节的复杂过程，科研人员需综合运用多种策略和技术手段进行优化。手册中还介绍了重编程方法的选择、 附加型（Episomal）载体重编程、仙台病毒（SeV）重编程，将成人细胞（如血细胞）重编程，使其具有多能性，顺利成为 iPSCs。

小师妹：学到了，那复苏环节要怎么优化呢？

part-2快速解冻复苏 iPSC

小师弟：快速解冻复苏诱导性多能干细胞（iPSC）时需要遵循一系列严格的操作步骤以确保细胞的存活率和功能完整性。以下是一些关键技巧：

● 将解冻的细胞溶液小心地逐滴加入到复苏培养基中，尽量保持细胞团块完整。

● 可在室温下以约 300 × g 离心 5 分钟，这样有助于去除冷冻保护剂并使细胞沉淀。

● 解冻后的几个小时内密切观察细胞状态，如有必要及时更换培养基，以减少冷冻损伤的可能性。

总之，整个过程应严格遵循无菌操作，在生物安全柜内完成，并且动作轻柔，避免对脆弱的 iPSC 造成物理损伤。

part-3建立无饲养层的培养系统

小师弟：接下来到了最关键一步——培养。一般而言，无饲养层培养基于这些原则：去除饲养层细胞，需添加其它的培养组分，以补偿失去的营养物、生长因子和细胞外基质蛋白。

基于这些发现，研究人员开发出了多种 feeder-free 的干细胞培养基，比如成分确定的无异源培养基，如 Essential 8 培养基和 Essential 8 Flex 培养基。最终研发出了经过优化的培养基，如 StemFlex 培养基，即使在更为苛刻的应用中，PSC 面临应激压力，培养基也能保证 PSC 的多能性和存活率。

具体工作流程、基质与传代方法手册中有更详细的说明。

小师弟：以上就是《多能干细胞实验方案手册》内对于干细胞培养的建议与操作流程推荐。你可以结合下面解冻复苏 iPSC 的视频一起学习，实验绝对一把过！

大部分干细胞实验操作视频，这个官网上都有在线课程，包括重编程、培养、基因编辑等，可以直接在线看，一边看一边学，效率加倍。识别下方二维码看视频全集

师妹：我在视频里看到 StemFlex 很好用，培养和分化细胞状态都不错的。

《多能干细胞实验方案手册》，囊括重编程、培养、转染、基因编辑和分化鉴定全流程的实验方法，点击阅读原文下载，带你一次搞定干细胞实验！

内容策划：王丹琦
内容审核：吴军

题图来源：图虫创意