ESC/iPSC研究利器——小鼠胚胎成纤维细胞MEF（文末有福利）

文末有福利，莫错过

如今，关于胚胎干细胞（ESC）与诱导多能干细胞（iPSC）的各种研究正在全球范围内展开。每个英雄的背后总有默默付出的隐士，本文要介绍的就是一个经常被大家忽视，可的确是非常重要的一种细胞——小鼠胚胎成纤维细胞（mouse embryonic fibroblast，MEF）。

因ESC与iPSC在体外培养极易自发分化，要解决这个问题，必须在培养体系中加入一些抑制分化因子或在饲养层体系中维持培养。而MEF细胞是一种自小鼠胚胎中分离而来的成纤维细胞，常在ESC/iPSC中作为饲养层细胞的存在。自1998年首次在人ESC体外培养体系建立以来，经久不衰持续使用。

图1. ESC/iPSC体外培养路线 (图源ATCC)

MEF细胞质量判断标准

当我们需要在ESC/iPSC培养中使用MEF作为饲养层细胞时，请留意以下3项质量判断标准：

01 MEF出现生长停滞

明确使用的MEF细胞已经过灭活处理，一般可采用CCK-8检测的方式，检测细胞是否已经灭活完全，判断标准是该细胞在体外不再增殖。

02 MEF复苏率高

需进行细胞存活率测试，冷冻复苏后MEF细胞存活率>80%。

03 对ESC/iPSC的支持能力

接种ESC/iPSC细胞，观察细胞形态，并检测ALP表达水平。

*ALP是一种PSC表型标志物，包括未分化的胚胎干细胞(ESC)、诱导多能性干细胞(iPSC)和胚胎生殖细胞(EGC)。ALP在大多数细胞类型中均有表达，但其在PSC内的表达水平明显升高。因此ALP染色已应用于PSC的鉴别染色，采用该方法可轻松将PSC与用作饲养细胞的MEF细胞及重编程实验中常用的亲代成纤维细胞区分开来。

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左图：OriCell®MEF(灭活）支持小鼠ESC(mESC)培养。将mESC接种在OriCell®MEF（灭活）细胞上。在MEF上生长的mESC菌落紧凑，边缘清晰，表明了健康的未分化ESC。

右图：对使用 OriCell®MEF(灭活）支持mESC培养的细胞进行固定，加入BCIP/NBT染色工作液进行染色，mESC被ALP染色，染色颜色较深，形态较好，边缘较清晰，立体感较强。

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