首次披露！淡水养虾的重要致病菌，以及有效的防治手段！

这项研究中，嗜水气单胞菌（A. hydrophila）被确认为淡水南美白对虾的病原体，其致死剂量 (LD50) 值为4.8×10 4 CFU/ml。同时，抗生素氟苯尼考对嗜水气单胞菌（A. hydrophila）有抑制作用，石榴提取物是氟苯尼考对淡水养殖白对虾致病菌的潜在治疗方法。

一、研究方法

1、淡水南美白对虾样品（6.80g±0.05）在上海奉贤某虾场采集，重量（6.80g±0.05）表现出肝胰腺萎缩，并在放置于无菌袋中并储存在冰上实验室。

2、在34个玻璃缸（76cm×50cm×48cm）（10尾虾/缸）中用100L农场水，pH7.5，溶解氧6.2毫克/升； 温度28摄氏度，评价各种草药和氟苯尼考之间的协同效应。

二、研究成果

1、确定病原体

在受感染的虾样本中没有发现寄生虫，所有测试的虾都表明这种疾病不是由寄生虫或病毒引起的。从受感染虾的肝胰腺样本中获得了五个分离株（编号为WS01至WS05），根据16S rRNA基因分析鉴定为芽孢杆菌属和嗜水气单胞菌。

对虾细菌感染结果表明，只有分离株（WS05）对白对虾具有致病性，LD50值为4.8×10 4 CFU/mL，相反，对照组虾没有观察到身体变化。受感染的虾显示出肝胰腺异常的迹象（图1），并且从实验感染的虾中重新分离出同一菌株（WS05），并通过表型和分子鉴定证实。此外，感染和感染虾的肝胰腺组织病理学变化显示肝胰腺小管排列紊乱和炎症细胞浸润（图2）。

形态学和生化鉴定结合分子生物学方法的结果证实，本研究从淡水白对虾中分离得到的菌株WS05为嗜水气单胞菌（A. hydrophila）。

图1. 虾被感染出现的症状。

(a) 肝胰腺萎缩（箭头处）； (b) 肝胰腺正常的健康虾（箭头）

图2. 病虾萎缩性肝胰腺组织病理学变化

2、致病菌株的抗生素敏感性

结果表明，菌株WS05对大多数抗生素敏感（新生霉素和利福平除外），包括：阿莫西林、复方新诺明、头孢噻肟、多西环素、恩诺沙星、氟苯尼考、庆大霉素、卡那霉素、萘啶酸、新霉素、奈替米星、苯唑西林、多粘菌素B、链霉素、四环素和妥布霉素。特别是菌株WS05对复方新诺明、多西环素、氟苯尼考、新霉素和四环素表现出高度敏感性，这些药物目前已获准用于水产养殖。

3、氟苯尼考草药提取物的协同作用

氟苯尼考和草药提取物单独或组合对WS05分离株的MIC（最低抑菌浓度）列于表1。结果表明，只有氟苯尼考和石榴提取物（石榴提取物）的组合是有效的，对分离的A. hydrophila具有协同抗菌作用，当与7.81mg/mL石榴提取物结合使用时，氟苯尼考对WS05分离物的MIC从0.50降至0.03mg/mL，氟苯尼考和石榴提取物组合的FICI计算为0.31。

然而，当与其他提取物结合使用时，例如：Tieu Kien、Xuyen Tu、Sea Cattle、Ha Thu O、Rhubarb、Huangqin、Elmosaur、Sai Ho、Licorice Jelly，没有抗菌活性。这表明石榴提取物可被视为氟苯尼考对抗A. hydrophila的潜在增效剂。

表1. 氟苯尼考和草药提取物单独或组合对分离的WS05的MIC

4、氟苯尼考联合石榴提取物的体外活性

对照组分离株WS05的细菌密度没有降低，氟苯尼考和石榴提取物的单一作用与对照组相比表现出轻微的抗菌活性。相比之下，氟苯尼考和石榴提取物的组合对菌株WS05表现出较强的抗菌活性，与单一抗生素治疗组相比，处理24小时后细胞密度降低≥ 3.61CFU/mL。

5、氟苯尼考联合石榴的保护作用

研究结果表明，氟苯尼考和石榴石榴提取物对南美白对虾有保护作用。

图3. 氟苯尼考和石榴对南美白对虾WS05的保护作用

三、研究结论

综上所述， 本研究首次证实嗜水气单胞菌（A. hydrophila）是淡水养殖南美白对虾的病原体。同时，抗生素氟苯尼考和石榴提取物对嗜水气单胞菌有抑制作用，是淡水养殖白对虾致病菌的潜在有效的治疗方法。