化学发光免疫试剂发生跳值，是何原因？如何解决？

化学发光免疫分析技术，通过对标记的化学发光物质发光的控制及测量，检测相应的生物标志物，因具有灵敏度高、检测快速、试剂稳定无生物毒性、易全自动等特点，成为免疫分析技术中最具发展前景的发光之一，在许多疾病的临床诊断中具有重大意义。

近几年来检验科关于跳值问题反馈较多，例如HBsAg、Anti-HBcll、等传染病项目，又比如一些高灵敏度项目，如TnI， TSH、HIV等项目。

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跳值定义及表现形式

跳值：英文表述Irreproducible false positive，discrepancy outlier/ false positive，initially reactive/positive

定义：为样本及测试条件所导致的非重现性假阳或初测假阳性。测试结果表现为RLU偏高，经过重复测试，结果趋于正常；且该现象的重现性低，与系统的精密度无关。

表现形式：针对样本管的首次测试，往往RLU偏高，见下表（ 雅培，Architect 系统）：

跳值这个现象同时发生在多种使用不同的方法学的仪器上上，如ELISA、放射免疫检测、化学发光、电化学发光。雅培、罗氏、贝克曼和西门子的检测系统均有跳值问题的报道。

国际厂家肌钙跳值概率：

厂家&试剂

跳值概率（95%置信区间）

跳值概率（95%置信区间）

Abbott Architect i2000SR STAT Troponin-I

0.10% (0.01%–0.19%)

0.48–1.95% ②

Beckman Coulter Access2 Enhanced AccuTnI

0.44% (0.25%–0.63%)

1.40% ③

Roche Cobas e601 TroponinT hs

0.06% (0.00%–0.13%)

Siemens ADVIA Centaur XP TnI-Ultra

0.10% (0.01%–0.19%)

雅培ARCHITECT系统HIV项目跳值概率：

贝克曼DxI系统不同项目的跳值概率：

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跳值发生的原因

目前发生跳值的原因目前还不是非常清楚，各个厂家给出的解释，以及相关文献报道的主要集中在分析前因素，比如样本凝血时间、凝集温度、离心条件、样本采集管等等。

1.病人本身（潜在干扰物质）。

2.采血管的材质、添加剂（不同厂家采血管质量不同，对于免疫项目影响不同）。

3.样本体积(样本体积过少可能会导致样本针吸取到凝胶血细胞等）。

4.采血后是否按照说明书要求颠倒混匀。

5.样本的运送方式（样本运输时，必须按照相应的州，联邦及国际有关样本与感染物质的运输规定进行包装并添加标签。样本可以在环境温度、2-8℃(冰包)或-20℃或更低温度(干冰)中运输。不要超过上 面所列的储存时间限制。运输前，建议将样本从凝块、血清分离胶或红细胞中分离出来）。

6.仪器运行过程中的电信号干扰。

7.样本凝血的时间★

评估项目：HIV

凝血时间

凝血小于5min

凝血20~30min

凝血1h以上

初测阳性数

20

2

0

复测阳性数

0

0

0

初测阳性率

50%

5%

0%

总样本数

40

40

80

由上图实验可看出凝血效果是否充分对跳值影响十分明显。如实验使用的为无添加剂的普通真空管，则一般厂家说明书上要求凝血时间为1 h或90 min以上；如果使用含促凝剂的血清管，则按照说明书要求，需要凝血20~30 min

8.样本的离心及转速★

评估项目：HIV

离心条件

3500rpm离心5 min

3500rpm离心15 min

初测阳性数

4

1

复测阳性数

0

0

异常值概率

0.72%

0.28%

总样本数

558

357

由上图实验可看出，增加离心时间可大大降低发生异常值的概率。离心时间和离心转速需要严格依照厂家说明书上推荐。

此外其他注意事项：采血体积达标、有添加剂的管抽血后及时颠倒混匀等都是会对样本凝血质量造成影响的因素。

03

解决措施

1.降低样本中的干扰物质对测试结果影响

控制样本质量：采血管、离心条件&速度&温度、采血体积

转移到微量杯测试

离心后重新测试

样本用竹签挑动表层后测试

其他注意事项：

2.延长样本离心时间

作者结论：个别标本由于离心制备不彻底，造成假阳性结果，如果忽略掉就会给临床造成误诊，引起不必要的医疗纠纷。故建议检验人员若遇到疑似阳性标本，最好延长离心时间，重复测定，可以降低假阳性率，增加检验结果的准确性。

3.增加血清标本的凝集时间

作者结论：考虑到孵育时间主要影响血液凝血是否充分，从而导致影响检测结果的纤维蛋白不能够从 血清中充分分离。通过测定不同处理条件下的纤维蛋白原浓度发现两组标本中的纤维蛋白原浓度差异 有统计学意义(P<0.01)，显示纤维蛋白可能是影响结果稳定性的一个重要因素。这与以前的研究认为 凝血不充分影响血清cTnl的测定结果一致。因此建议用血清标本检测cTnI浓度时须严格控制孵育时间， 最好以孵育20 min后处理为好，以降低假阳性率。

4.增加离心转速

雅培HBsAg项目，也存在因样本前处理条件不够，导致一定假阳性概率。

文献研究结果：2898g 10min分离血清，HBsAg假阳率9.82%；样本的离心处理好坏直接影响实验结果的准确性

5.离心后重测

作者结论：血液必须完全凝集，并经过彻底离心。保证血清与血凝块完全分离。2000g，10min可以将纤维蛋白从血清中完全分离。经过再次离心后重测，降低假阳性概率。

作者结论：假阳性样本，经过再次离心后测试， 测试结果能够回归正常。

6.更换采血管

BD专门推出缩短前处理时间的采血管, 并且有效降低假阳性概率

7.其他注意事项

任何检测平台跳值问题都是不可避免，即使所有试剂耗材为原厂以及前处理操作规范。该问题也不可能完全得到解决。为保证检验结果准确性建议对所有阳性样本进行复测，可大大降低跳值发生的概率，有效的控制实验室的质量，也可避免医院与病人之间产生不必要的医疗纠纷。

相关文献：

Outliers as a Cause of False Cardiac Troponin Results:Investigating the Robustness of 4 Contemporary Assays，Clinical Chemistry，2011，57:5710–718

Comparison of cardiac TnI outliers using a contemporary and a high-sensitivity assay on the Abbott Architect platform，Annals of Clinical Biochemistry，2014, Vol. 51(4) 507–511；

Evidence on the cause of false positive troponin I results with the Beckman AccuTnI method，Clin Chem Lab Med 2011;49(6):1079–1080

Evaluation of the performance of the Abbott ARCHITECT HIV Ag/Ab Combo Assay，Journal of Clinical Virology 52S (2011) S51– S55

Coulter Unicel DxI Immunoassays，Am J Clin Pathol 2011;136:325-329

Comparison of cardiac TnI outliers using a contemporary and a high-sensitivity assay on the Abbott Architect Platform，Annals of Clinical Biochemistry, 2014, Vol. 51(4) 507–511

Use of the BD Vacutainer Rapid Serum Tube Reduces False-Positive Results for Selected Beckman Coulter Unicel DxI Immunoassaysm,

Am J Clin Pathol 2011;136:325-329

BD rapid serum tubes reduce false positive plasma troponin T results on the Roche Cobas e411 analyzer, Clinical Biochemistry 45 (2012) 842–844

离心时间对心肌肌钙蛋白I检测结果的影响，检验医学与临床2010年5月第7卷第9期，833-834（贝克曼，DXI800）

分析前处理因素对化学发光法cTnI检测结果的影响分析，检验医学与临床20l0年3月第7 卷第6期，534-535（贝克曼系统）

False Increases of Troponin I attribute to incomplete separation of serum, Clinical Chemistry 45, No. 5, 1999（Abbott AxSYMMT）

Specimen Recentrifugation and Elevated Troponin I Levels，Winter 2015 | Volume 46, Number 1 Lab Medicine（Beckman Access 2）

医学检验沙龙整理自苏州润赢医疗、灯塔光免小助手等

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