规模场使用断奶前口腔液样本监测PRRSV的传播

题目：使用断奶前口腔液样本监测PRRSV野毒株的传播

摘要：在4个母猪群(每个母猪群约12500头)中，评估了在断奶前一天从每窝仔猪(n = 600)收集的口液样本，作为一种监测猪繁殖和呼吸综合征病毒(PRRSV)感染的方法。将每窝母猪的血清样本(n = 600)做比较。4个猪群均为感染地方性PRRSV，所有母猪均接种过2次PRRSV弱毒疫苗。所有样本采集后，随机取样，采用PRRSV实时反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)和4种PRRSV抗体ELISA(IgM、IgA、IgG、商业试剂盒)检测。所有母猪血清样本经PRRSV RT-qPCR检测均为阴性，但在两个实验室，600份口腔液样本中有9份呈阳性。对9份阳性口腔液样本中的2份进行ORF5测序，确定感染源为野毒株。RT-qPCR阳性口腔液与阴性口腔液抗体反应比较显示，RT-qPCR阳性口腔液IgG S/P比值显著升高(均值S/P为3.46 vs. 2.36; p = 0.02)。 同样，RT-qPCR阳性的窝仔口腔液样本的母猪血清中IgG显著升高(平均S/P为1.73 vs. 0.98; p < 0.001)和商业试剂盒(平均S/ p为1.97 vs. 0.98; p < 0.001) S/P比值。总体上说，研究表明，断奶前断奶窝仔口腔液样本可以提供一种有效和敏感的方法，以监测感染、接种疫苗或推定为阴性猪群中的PRRSV。

表1：对母猪血清、粪便、口腔液采样的总结

注释：

Calendar week and month：日历：周和月

a 所有母猪实验之前接种两次“MLV”(Ingelvac MLV1, Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc.， St. Joseph)。

b 在第9周和第13周接种“ATP”(Ingelvac ATP1, Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc.， St. Joseph)。

c 在第1周和第4周接种“ATP”，在第5周接种“MLV”。

d 在第2、20和24周接种“ATP”。

e 在第1周接种“ATP”，在第5周接种“MLV”。

表2：测定方法和样品类型的定性结果比较

注释：PRRSV antibody assay(sample matrix) n = 600：PRRSV抗体测定(样本矩阵)n = 600

Negative S/P<0.4：阴性S/P<0.4

Positive S/P≥0.4：阳性S/P≥0.4

% Positive：阳性率

Statistically significant pairwise comparisons：统计上显著的两两比较

a PRRS X3抗体测试(IDEXX Laboratories,Inc.，Westbrook,ME)。

b PRRS口腔液抗体检测(IDEXX Laboratories,，Inc.，Westbrook,ME)。

c PRRS X3 Ab Test (IDEXX Laboratories, Inc.， Westbrook, ME)改进后可检测血清和口腔液样本中的抗PRRSV抗体IgG。

表3：母猪血清和窝仔口腔液抗PRRSV抗体检测结果

注释：Mean serum antibody ELISA S/P ratio (SEM)：平均血清抗体ELISA S/P比值(SEM)

Mean oral fluid antibody ELISA S/P ratio (SEM)：平均口腔液抗体ELISA S/P比(SEM)

a、b、c不同的上标字母表示均值之间有统计学差异(p < 0.05)。

表4：对RT-qPCR阳性口腔液样本进行随机检测(母猪血清和窝仔口腔液)

注释：

Farm：猪场

Calendar week：日历周

Sow parity：母猪胎次

Litter size：窝大小

Serum Ct and S/P ratios (sow)：血清Ct值和S/P值

Pre-weaning oral fluid testing results (litter)：断奶前口腔液测试结果(窝)

a 循环阈值(Ct)值大于37被认为是阴性(由爱荷华州立大学兽医诊断实验室测试)。

b 循环阈值(Ct)值大于38认为为阴性(由马里兰州Rockville的Tetracore公司测试)。

c PRRS X3 Ab Test (IDEXX Laboratories, Inc.， Westbrook, ME)改进用于检测血清和口腔样本中的抗PRRSV抗体。

(Kittawornrat et al.， 2012a,b)。

d PRRS X3抗体检测(IDEXX Laboratories, Inc.， Westbrook, ME)。

e PRRS口腔液抗体检测(IDEXX实验室，Inc.， Westbrook, ME)。

f PRRSV ORF5序列取自口腔液样本。

表5：基于PRRSV分离株ORF5核苷酸两两比较百分比

注释：

a 猪场2分离株07/2011和猪场3分离株08/2011的序列来源于本研究采集的口腔液样本。其他猪场2和猪场3病毒来自与流产有关的母猪血清样本，并提交兽医诊断实验室进行常规检测。

b Ingelvac ATP1, Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc.， St. Joseph, MO。

c Ingelvac MLV1, Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc.， St. Joseph, MO。

图1：母猪血清与窝仔口腔液样本S/P值的相关性研究。样本采用PRRSV IgG ELISA检测。

注释：

sow serum S/P ratio：母猪血清S/P值

Litter oral fluid S/P ratio：窝仔口腔液S/P值

图2：母猪血清与窝仔口腔液样本S/P值的相关性研究。使用PRRS X3抗体检测(血清)或PRRS口腔液抗体检测(口腔液)。

注释：sow serum S/P ratio：母猪血清S/P值

Litter oral fluid S/P ratio：窝仔口腔液S/P值