小鼠掩埋食物测试标准化方案（适配分析系统）

掩埋食物测试（Buried Food Test, BFT）是啮齿类嗅觉功能检测的经典刚需性行为范式，区别于被动嗅觉刺激实验，该实验依靠小鼠饥饿驱动的主动觅食行为，真实反映动物嗅觉感知灵敏度、气味定位能力、嗅觉介导的目标搜寻行为。

该范式操作应激低、稳定性高，广泛用于嗅球损伤、神经退行性病变、自闭症模型及药物嗅觉修复效应评价。通过VisuTrack视频追踪系统可全自动量化觅食潜伏期、挖刨行为、区域探索偏好，彻底规避人工计时与主观判读带来的实验偏差，实现嗅觉功能检测标准化。

一、实验动物与前期驯化

1.选用8周龄及以上健康C57BL/6J、CD1小鼠，同批次动物年龄、体重无显著差异，避免年龄相关嗅觉神经发生差异干扰结果。

2.统一使用雄性小鼠排除动情周期激素波动影响。实验前3 d，在笼内投放测试用适口性食物颗粒，使小鼠提前适应食物气味，消除新异食物恐惧导致的觅食抑制。

3.实验前禁食18–24 h、自由饮水，统一饥饿基线，保证觅食动机一致，不限制饮水可避免脱水应激。每组设置10–12只小鼠，降低个体行为离散度。

二、实验设备与耗材

1.实验采用标准化觅食行为箱体，箱体尺寸45 cm×25 cm×20 cm，平底光滑无死角，可均匀铺设垫料。

2.配套VisuTrack高清视频采集与行为分析系统，顶部垂直摄像，全程录像追踪小鼠运动轨迹、挖刨动作及目标区域停留行为。

3.耗材选用无尘无菌动物垫料、统一规格适口性食物颗粒，每轮实验配备全新垫料，杜绝气味残留干扰。

4.测试环境恒温23±2 ℃，静音暗光、无外源气味干扰，保证嗅觉线索单一。

三、标准化实验流程

1. 箱体适应阶段

测试箱内均匀铺设3–4 cm厚洁净垫料，无任何食物刺激。将小鼠单独放入箱体自由探索5 min，完成环境适应，消除陌生箱体导致的僵直、探索减少等干扰行为，VisuTrack同步记录基础活动水平，用于后续运动能力校正。

2. 掩埋食物测试

取出小鼠，在箱体任意固定角落将单颗食物颗粒埋于垫料下约1 cm深度，表面平整无明显凸起，消除视觉线索干扰。将小鼠置于箱体对角起始位置，即刻开始录像计时。实验最大观察时长设置300 s。小鼠以前爪扒开垫料、抓取食物并开始啃咬视为寻获成功，记录觅食潜伏期。若300 s内未找到食物，终止测试，潜伏期统一赋值300 s。

3. 空白对照实验（排除非嗅觉干扰）

为区分嗅觉障碍与运动、探索动机异常，隔日开展表面食物对照测试：食物直接放置于垫料表面，重复上述流程。若表面食物觅食正常、掩埋食物潜伏期显著延长，可判定为特异性嗅觉功能下降；若两组潜伏期均延长，则判定为探索动机或体能异常，排除嗅觉损伤。

四、VisuTrack软件分析指标

系统自动划定食物目标区、起始区与周边探索区域，全程量化行为参数：觅食潜伏期、目标区域趋近次数、有效挖刨时长、总探索距离、区域停留占比。相较于传统单一计时法，软件可同步区分“主动搜寻挖刨”与“随机游走”，精准判定嗅觉驱动的目标搜寻行为，有效剔除运动能力、探索意愿混杂因素，提升嗅觉表型特异性。

五、实验质控与误差规避

垫料厚度、掩埋深度全程统一，防止视觉线索泄露；每只小鼠测试完毕彻底更换全新垫料，消除残留食物气味、尿液气味干扰；严格统一禁食时长，保证觅食动机基线一致；暗光静音环境避免小鼠应激呆滞；增设表面食物对照，从机制上区分嗅觉缺陷与 general 行为下降，是该实验数据可信的核心质控要点。

六、统计学方法

组间觅食潜伏期采用独立样本t检验或单因素方差分析，结合对照实验数据进行双变量校验，P＜0.05为差异具有统计学意义，精准评价模型小鼠嗅觉感知与气味定位功能损伤程度。

参考文献

[1] Yang M, Crawley J N. Simple behavioral assessment of mouse olfaction[J]. Current Protocols in Neuroscience, 2009, 48(1): 8.24.1-8.24.12.

[2] Lehmkuhl A M, et al. Buried food-seeking test for the assessment of olfactory detection in mice[J]. Bio-protocol, 2018, 8(16): e2897.

[3] 上海欣软. 啮齿类嗅觉觅食行为检测技术规范[Z]. 2024.

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