【重磅新品】快速评估tLNP递送潜力—DTrack内吞效率检测方案

（来源：ACROBiosystems官方）

In vivo CAR-T正迅速成为细胞治疗领域最受关注的前沿赛道之一。近期，Kelonia、南京传奇等企业陆续公布积极的临床进展，再次点燃了市场对这一“下一代CAR-T”技术路线的期待。与传统CAR-T需要经历细胞采集、体外基因修饰和回输等复杂流程不同，In vivo CAR-T通过递送系统直接在患者体内生成CAR-T细胞，有望实现更低成本、更短治疗周期以及更广泛的患者可及性。其中，靶向脂质纳米颗粒（targeted Lipid Nanoparticles，tLNP）凭借高效、安全的核酸递送能力，已成为当前最具潜力的技术平台之一。tLNP能够将CAR编码mRNA精准递送至T细胞，在体内原位生成CAR-T细胞。目前，该策略已在肿瘤、自身免疫疾病及心血管疾病等多个领域展现出良好的治疗潜力。然而，尽管研究人员已经开发出多种针对不同T细胞表面受体的tLNP系统，不同靶点之间的递送效率和体内CAR-T生成能力仍存在显著差异，其背后的作用机制尚未完全明确。

（来源：Science (New York, N.Y.) vol. 388,6753 (2025): 1311-1317.）

tLNP内吞效率：驱动体内CAR-T生成的核心引擎

近日，Capstan Therapeutics联合创始人Hamideh Parhiz团队发表重要研究，首次系统评估了不同T细胞靶向受体对tLNP递送效率的影响。研究发现，与传统认知不同，靶受体的表达丰度并非决定递送效果的关键，受体内吞效率才是影响mRNA递送和体内CAR-T生成效率的核心因素。这一发现为下一代In vivo CAR-T递送载体设计提供了全新思路。

该研究系统比较了靶向CD2、CD4、CD5、CD7、CD8及CD4/CD8双靶向tLNP在原代人T细胞中的mRNA递送能力，并揭示了影响递送效率的关键因素。

① 丰度不等于高效率：转录组及流式分析均证实，CD2是T细胞表面表达量最高的受体，其蛋白水平是CD7的2倍以上，是CD5的3倍以上。按传统“丰度决定论”，靶向CD2的tLNP应表现最优。然而事实截然相反：aCD2/tLNP的递送效率仅排第三，且蛋白表达强度（MFI）仅为aCD7/tLNP的五分之一。也就是说，T 细胞表面受体丰度高，并不能保证特异性靶向该受体的 tLNP 拥有更高的 T 细胞转染效率。

② 内吞动力学是决定性指标：为探究差异根源，研究者利用pH敏感的FabFluor标记系统，对受体-抗体复合物的内化过程进行了实时定量监测。结果显示：aCD7抗体表现出最高的内吞水平，在4小时监测窗口内，aCD7的内化信号远超CD71（CD71是转铁蛋白受体，经典的高内吞阳性对照），而aCD2的内化信号极弱。

③ RNA胞内积累与内吞水平呈高度正相关: 通过Cy5荧光标记mRNA示踪，研究发现胞内mRNA的积累量与抗体-受体内化水平呈高度正相关（Pearson r = 0.894, p < 0.0001）。aCD7/tLNP处理组在4小时即展现出最高的胞内mRNA信号。

④ 高内吞效率的aCD7/tLNP实现高效体内CAR-T细胞生成： 在人源化小鼠模型中，装载抗CD20 CAR mRNA的aCD7/tLNP，以2.5 μg/只的低剂量，在24小时内即在脾脏中成功生成CAR-T细胞（CD4+ T细胞中约25%表达CAR，CD8+ T细胞中约40%表达），并驱动了近乎完全的B细胞清除。这一效率显著优于同条件下对照的aCD2/tLNP，且血清生化分析显示良好安全性。

结语

本研究首次系统证明，在T细胞靶向递送过程中，受体内吞效率而非受体表达丰度，才是影响mRNA递送效率和体内CAR-T生成效果的关键因素。这一发现提示，企业在开展In vivo CAR-T递送系统开发时，应将受体内吞能力纳入关键评价指标，通过建立相关检测和监测体系，为递送靶点筛选及载体优化提供更科学的决策依据。与此同时，受体内吞水平的检测还具有重要的研发前移价值，相比于等待CAR表达结果甚至体内药效数据来验证递送方案优劣，内吞效率评估能够在研发早期快速识别潜在问题，提前筛除低效靶点或递送策略，从而减少试错成本、缩短开发周期，加快方案迭代优化。对于竞争日趋激烈的In vivo CAR-T赛道而言，将关键评价指标前置，或将成为提升研发效率和成功率的重要策略。目前，In vivo CAR-T的发展仍处于加速演进阶段，随着递送等机制的不断阐明，更多关键影响因素将被识别和利用，研发效率持续提升，加速推动In vivo CAR-T从临床创新迈向产业化发展。

【重磅新品】DTrack™内吞效率检测方案

随着In vivo CAR-T递送技术的快速发展，scFv和VHH凭借分子量小、空间位阻低、免疫原性较低等优势，已成为当前tLNP表面靶向修饰的主流抗体形式。针对In vivo CAR-T开发过程中缺乏高效、便捷的tLNP内吞效率检测工具这一研发痛点，ACROBiosystems百普赛斯重磅推出一系列适配IgG、scFv（G4S Linker、218 Linker）及VHH等不同抗体形式的DTrack™ pH敏感染料标记通用型抗体，可用于tLNP内吞效率的快速检测，帮助研发人员评估递送潜力、筛选最优靶向配体，为实现高效体内 CAR-T 细胞工程化构建提供实践依据。

检测原理

产品优势

产品覆盖全面: 针对lgG、scFv、VHH等主流tLNP靶向配体，提供完整的内吞检测产品体系。

检测精准可靠: pH敏感染料”关-开"式荧光设计，低背景、高噪比，精准反映受体内吞过程。

研发效率提升:加快高潜力配体筛选与递送体系优化。

验证数据

• PH敏感染料标记的Anti-G4S linker antibody与含有G4S linker的LNP表面修饰Anti-CD8 antibody结合后通过与T细胞表面的CD8受体结合发生内吞，在胞内酸性环境中可检测到红色荧光信号，进而可判断tLNP的内吞效率。

tLNP-hCD8 scFv Ab (containing G4S linker) and negative control tLNP were labeled with PH Sensitive Anti-G4S Linker Labeling Reagent . CD3+ T cells were separately treated with pH-sensitive Dye-Labeled tLNP-hCD8 scFv Ab conjugates or negative control for 4 hours, then analysis by Flow cytometric. APC signal was used to evaluate the activity.

• PH敏感染料标记的Anti-VHH antibody与LNP表面修饰的Anti-CD8 VHH antibody结合后通过与T细胞表面的CD8受体结合发生内吞，在胞内酸性环境中可检测到红色荧光信号，进而可判断tLNP的内吞效率。

tLNP-hCD8-Ab (VHH format) were labeled with PH Sensitive Anti-Camelid VHH (M1A11) Labeling Reagent . CD3+ T cells were separately treated with pH-sensitive Dye-Labeled tLNP-hCD8 VHH Ab conjugates or pH-sensitive Dye alone for 4 hours, then analysis by Flow cytometric. APC signal was used to evaluate the activity.

• PH Sensitive Anti-Human IgG Labeling Reagent检测偶联CD8抗体（human Fc）的LNP内吞。试剂与LNP表面抗体结合并内吞进入酸性内体或溶酶体后可检测到红色荧光。

tLNP-hCD8 Ab and LNP-Human IgG1 Kappa Isotype Control were labeled with PH Sensitive Anti-Human IgG Labeling Reagent . CD3+ T cells were separately treated with pH-sensitive Dye-Labeled tLNP-hCD8 Ab or isotype control conjugates for 4 hours, then analysis by Flow cytometric. APC signal was used to evaluate the activity.