【案鉴·创新】| 低温还原策略助力DAR组分提升：从“合格就行”到“精准可控”

随着ADC药物向高质量、高均一性迭代，定点偶联技术凭借位点精准、产物均一等优势，已成为全球创新药研发的主流方向。然而，在早期临床开发阶段，半胱氨酸随机偶联技术依然凭借工艺成熟、开发周期短、成本可控等不可替代的优势，成为众多Biotech的首选路径——目前全球已获批的21款ADC药物中，60%采用了该技术。

药物-抗体比率（DAR）作为核心质量属性，直接决定ADC的药效与安全性窗口。随机偶联技术面临一个核心痛点：DAR值（药物抗体比）的分布宽、批次间波动大，传统工艺往往只能做到“合格”，难以实现对DAR组分的精细调控。这不仅影响药效与安全性的平衡，也限制了后续工艺放大的稳定性。凯莱英生物在布局定点偶联前沿技术的同时，持续突破传统工艺瓶颈，通过精细化控制还原度与纯化工艺，精准实现DAR窄谱分布，助力经典半胱氨酸偶联在早期研发中焕发更高价值。

传统半胱氨酸随机偶联存在固有短板：即便平均DAR达标，体系中仍会大量出DAR=0（无效组分）、DAR≥6（高毒组分）及奇数峰等非预期组分，导致异质性高、成药性风险大。凯莱英生物针对这一行业难题，创新开发了低温还原策略，在不改变随机偶联技术框架的前提下，实现了DAR组分从“合格就行”到“精准可控”的跨越。本文将通过一个实战案例，详细拆解该策略的关键工艺参数、调控逻辑及实际效果，为ADC药物研发过程中的DAR控制提供一条可落地的新思路。

行业现状：DAR“合格” ≠ DAR“理想”

以经典的半胱氨酸DAR4还原偶联为例，传统工艺通常采用室温或37℃条件下用TCEP或DTT还原抗体二硫键，再与含马来酰亚胺的Payload偶联。该方法虽操作简便，但还原过程剧烈、偶联反应快且不可控，极易导致：

• 还原不均：部分链未打开，部分过度还原

• 偶联位点竞争激烈：高低DAR、异构组分共存

• 奇数DAR峰频现（如DAR1、3、5、7）：结构不对称或副反应发生

这些“杂峰”不仅增加下游纯化难度和成本，更在CMC申报中引发监管关注——CDE提出“考虑到 ADC产品的高异质性，建议关注偶联工艺中抗体二硫键的还原位点和还原比例（如适用）、偶联位点和结合数量的控制、 有效载荷的分布、杂质的偶联情况等，从而确定合理的工艺参数。” 若无法证明DAR值分布、杂质可控，可能面临申报挑战。

解决方案：从“温度”切入，提升目标DAR值组分占比

面对这一共性挑战，凯莱英生物从还原反应动力学角度出发，经过多轮文献调研和平台化实验探索，发现低温还原可有效提高半胱氨酸随机偶联目标DAR值组分占比。

核心策略：低温还原

相比于传统“高温快反”模式，我们建立了基于低温还原的DAR值组分控制平台：

• 还原阶段：将反应温度控制在低温区间，显著减缓还原速率，实现链间二硫键的可控还原；

• 开发过程监控：结合HIC（疏水相互作用色谱），实时追踪各DAR组分变化。

通过系统性OFAT（一次一因子实验）与DoE（实验设计）实验，我们深入研究了温度、浓度、投料比、反应时间等参数的交互作用，并建立了平台控制策略。结果显示：

在多个IgG1单抗ADC项目中，该策略成功将DAR4占比从不足40%提升至50%+，奇数峰几乎消失，色谱图呈现“干净单峰”特征，且适用于不同抗体、小分子类型的偶联。

平台优势：效率提升、工艺放大稳健和通用性强

• 开发效率显著提升：

基于平台策略，新项目可在2周内完成温度窗口初筛与复筛，加速开发进度。

• 工艺稳健&放大稳健：

平台已实现多批mg-百g规模成功放大，DAR值分布均满足预期。

• 通用性强，适配未来需求：

目前该策略已成功应用于HER2、TROP2等多个靶点的单抗ADC。面对偶联药物的快速发展和日益增长的需求，凯莱英生物正积极拓展该平台的适用性（包括双抗ADC、双毒ADC等新型ADC）——初步数据显示，对于双抗分子ADC，低温策略同样适用。

结语：工艺控制策略助力产品质量提升

ADC的成功，不仅是分子的创新，也在于CMC阶段偶联工艺与产品质量的控制。低温还原策略不依赖昂贵的新技术，而是基于对还原反应动力学理解与工艺控制，实现目标DAR值组分占比的大幅提升。面对DAR组分复杂、纯化困难、申报受阻等挑战，不妨试试这条“冷”路径——有时候，慢一点，反而更快；冷一点，反而更稳。

参考文献

【1】Fan Q, et al. A review of conjugation technologies for antibody drug conjugates. Antib Ther. 2025; 8(2):157-170. DOI: 10.1093/abt/tbaf010.

【2】Noguchi S, et al. Method for selectively manufacturing antibody-drug conjugate. 2021.

【3】Walsh S J, et al. Site-selective modification strategies in antibody–drug conjugates.Chemical Society Reviews.2021; 50(2):1305-1353.doi:10.1039/D0CS00310G.

【4】国家药品监督管理局. 抗体偶联药物药学研究与评价技术指导原则.2024.

关于凯莱英生物AsymBio

凯莱英生物是凯莱英医药集团（股票代码：002821.SZ/6821.HK）战略新兴业务，聚焦于生物药CDMO服务。凭借先进的技术平台以及丰富的项目经验，为全球客户提供各类新型偶联药物、抗体和重组蛋白药物等一站式CDMO解决方案，具备早期研发、工艺开发、毒理批次、临床批次和商业化批次生产的端到端服务能力。凯莱英生物致力于成为全球生物药客户值得信赖的合作伙伴，赋能全球生物医药创新，加速药品上市进程。更多信息，请访问：www.asymbio.com.cn