项目分享：亚硝胺类基因毒性杂质研究检测

亚硝胺类化合物（N-亚硝胺）是一类结构通式为R₁R₂-N-N=O的化学物质，大量研究证实许多亚硝胺具有致突变和致癌活性。2018年，在血管紧张素II受体拮抗剂（ARB，俗称“沙坦”）类药物缬沙坦中检测出NDMA，引发了全球范围内对药品中亚硝胺杂质的高度关注。

2017年发布的ICH M7指南将N-亚硝胺列为“关注队列”，并规定其可接受摄入量（AI）远低于一般杂质的毒理学关注阈值（TTC）。

美国FDA在2020年发布了首个关于人用药中亚硝胺杂质控制的指南，随后在2021年发布了修订版。这一系列指南明确了亚硝胺杂质的两大类别：一类是与API结构无关的“小分子”亚硝胺（如NDMA、NDEA等）；另一类是与API结构相关的“药物物质相关杂质”（NDSRI），这类杂质对每种API通常是独一无二的。

亚硝胺杂质的来源与形成机制

深入理解亚硝胺杂质的形成机制是有效控制其风险的基础。监管机构发布的指南中详细阐述了药品中亚硝胺可能产生的多种根本原因：

合成工艺中的化学因素

在原料药（API）的合成过程中，若仲胺、叔胺或季铵盐与亚硝化剂（如亚硝酸盐）在酸性条件下共存，就可能发生N-亚硝化反应，生成亚硝胺杂质。

物料回收与交叉污染

使用未经充分纯化的回收溶剂、试剂或催化剂是亚硝胺污染的另一大风险来源。

原材料引入

包括起始物料、试剂、催化剂等可能受到亚硝胺或其前体污染。这些杂质可能在生产过程中被带入，或在储存运输过程中因交叉污染而引入。

制剂过程与辅料因素

药品的制剂过程和所用辅料也可能成为亚硝胺杂质的来源。

含有N-亚硝胺杂质的药品名称和结构

检测方法的技术挑战

亚硝胺杂质往往以极低浓度存在于复杂的基质中，这对检测方法的灵敏度和选择性提出了极高要求。监管机构建议的AI限度通常在纳克级甚至更低，这意味着分析方法必须具备极高的灵敏度和专属性。

且需要考虑实际样品的基质效应可能严重干扰目标化合物的检测，增加假阳性和假阴性的风险。微源检测实验室可通过高效液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）或气相色谱-质谱（GC-MS）等技术手段对各类型亚硝胺基因毒性杂质进行分析检测。

例如，对于挥发性且相对热稳定的亚硝胺如NDMA、NDEA，可以采用GC-MS/MS或者LC-MS/MS，对于非挥发性或热不稳定的亚硝胺，采用LC-MS/MS，而NDSRI往往分子量较大、极性更强，可能需要特殊的色谱条件和离子化方式。

微源检测实验室案例

液质联用法检测片剂中多种亚硝胺杂质

实验室参考药典分析方法验证指导原则的要求，采用液质联用法对某片剂中多种亚硝胺杂质进行检测：N-亚硝基二甲胺（NDMA）、N-亚硝基二乙胺（NDEA）、乙基异丙基亚硝胺（NEIPA）、N-亚硝基二异丙胺（NDIPA）和N-亚硝基二正丁胺（NDBA），开发方法排除检测过程中亚硝胺杂质对结果的干扰，对仪器设备及人员经验要求较高。

离子色谱法检测亚硝酸钠

某产品合成过程中使用了亚硝化试剂作为原辅料，需要对亚硝酸钠含量进行严格控制。通过对样品的分析，实验室开发利用离子色谱法对其中亚硝酸钠的含量进行检测的方法，开发的离子色谱检测方法灵敏度高，峰形良好，并不受其它常规阴离子杂质的干扰，在产品质量控制中发挥重要作用。

超高效液相色谱-三重四级杆质谱检测NDSRI

采用超高效液相色谱-三重四级杆质谱（UPLC-MSMS）测定注射液中N-亚硝基呋塞米残留量。联合前处理工艺改良与质谱响应优化，从根本上解决基质效应干扰；引入专项技术规避假阳性干扰，还原样品真实的杂质水平。检测流程闭环合规，定量数据精准无误，为产品合规性提供坚实证明。

微源检测实验室积累丰富基因毒性杂质研究经验，完结亚硝胺等百余项基因毒性杂质检测项目，积累了包括亚硝胺类、磺酸酯类、叠氮类、肼类、卤代烷烃及酰卤类化合物、芳香胺和芳香硝基化合物、不饱和酮，醛类等已知的所有警示结构分析方法。

可为基因毒性杂质研究提供工艺评估、控制策略制定、分析方法开发、验证及放行检测等一站式解决方案。针对工艺进行全面评估，结合毒理学数据分析和法规解读，制定合理的控制策略，出具完整的评估及控制分析报告。服务多家企业，符合各种法规要求，帮助不同品种的研究资料申报成功。