【合成操作】同样是爬大板，为啥别人刮下来的可以交货，你的只有80%纯度？

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制备薄层色谱(Prep TLC)是一种 非常实用的 用于少量样品纯化的技术。PTLC可以快速分离反应体系混合物中的多种组分，因此对于获得试验反应产物或天然提取物组分的分离尤其有用。 此技术需要多次实践才能熟练掌握，新手一定要向实验室里师兄师姐多请教。 【】

常见制备板尺寸: 20cm × 20cm, SiO2厚度0.25 mm。 难分离样品载量: 10-25mg；较难分离样品载量：25-50mg；易 分离样品 载量: 50- 90mg。 国内很多厂家的制备板厚度可以到1mm，板越厚载样量越大。

制备薄层色谱(PTLC)操作流程：上样--展开--检测--刮板--洗脱

样品要求：因为硅胶板是弱酸性的，对酸不稳定的化合物尽量避免爬大板；对空气，水，有机溶剂稳定； 低沸点的溶剂里要好溶；最好有紫外吸收；极性不能太大（至少展开剂能爬起来）。

上样：尽量少的溶剂溶解样品，最好是易挥发的，二氯甲烷最常用，如果不溶可以加几滴甲醇促溶。可以用一次性滴管塞棉花后剪成毛笔状上样，每个人的办法都不同，小编就是这么弄的，顺便练练毛笔字。上样时也最好像写毛笔字一样一气呵成，这样跑出来的带比较均匀。如样品溶液太多需要上两遍样，先用吹风机吹干溶剂后再上样，不稳定的样品千万不要用热风吹，或者直接用氮气流吹干。通常情况下， 每块20X20的大板上样量：40-60mg; 如果反应比较杂的话，可适当减少上样量；上样的样品带距离两端大约1cm, 距离底边大约2-3cm，总之控制样品带的高度一定要高于展开缸中展开剂的高度。 溶解度差的样品，要减少上样量防止拖尾。

展开：展开之前，一定将溶剂吹干或晾干，否则会导致色带的形状不规则。展开剂的选择，先用小板爬样，具体怎么爬小板，请回看往期文章（），选到合适的展开剂后，配好溶剂爬大板，由于大板和小板由细微的差别，大板展开剂的极性可以稍微比小板展开剂的极性大一点，一样的话也问题不大。跑板溶剂前沿最好要跑到距离顶端1cm左右，充分展开样品，切记不要跑过，跑过的话，极性小的点可能会被展开剂冲都一起，而极性大的点虽然不会冲到上面，但会变散，不容易判断色带的边缘。

另外，如果上样的色带较宽或者不规则，可以在展开之前提前利用大极性溶剂预展开2-3cm，将宽色带压缩成窄带，然后拿出来重新吹干，然后再正常展开。

展开时，和爬小板类似，要保持展缸内较高的蒸汽压，最好用重物压紧展缸盖。如果展缸有裂纹的话，二氯甲烷甲醇体系千万不要用，石油醚乙酸乙酯体系可以考虑，总之效果都不好。 一个好的溶剂体系应该使混合物中所有的化合物都离开基线，但并不使所有化合物都到达溶剂前端，Rf值最好在0.2~0.8之间。薄层色谱分析的目标产物点Rf最好0.4~0.6之间。那么，应该选取哪些溶剂呢？一些标准溶剂和他们的相对极性列于如下：【 】

常用展开体系极性大小顺序

石油醚 <正己烷<二氯甲烷<四氢呋喃<乙酸乙酯<丙酮<正丙醇<甲醇<水< pan>

常用的混合体系

EA/PE(hexanes)，DCM/MeOH

PE/DCM，PE/Acetone，Ether/DCM，EA/DCM，Acetone/DCM

展开剂的选择原则

1、对所需成分有良好的溶解性;

2、可使各成分间有较好的分离；

3、待测组分的Rf在0.2~0.8之间，目标产物点Rf最好0.4~0.6之间，；

4、不与待测组分发生化学反应;

5、沸点适中，黏度较小;

6、展开后组分斑点圆且集中;

7、混合溶剂要新鲜配制。

8、如果一次展开后，发现分离效果不佳，可以考虑吹干后重复展开。

检测：产品的判断，通过极性大致判断哪几个色带可能是产品，然后每个色带可以先刮一点，碾碎，加溶剂溶解，过滤送LCMS检测判断。

能爬大板的样品一般是有紫外吸收的化合物，这样可以准确判断产物的准确位置并取得较好的纯化效果。没有紫外吸收的化合物也可以爬大板，但是得到产物的纯度全靠运气了！建议使用微量柱层析纯化【】。无紫外吸收的样品可以参照以下方法盲刮，我们将制备板的一侧进行部分显色，活用玻璃刀将TLC板分割下小部分，通过部分的显色情况，来反推整块板的显色情况，所以相对的对板的展开效果的要求比较高，如果爬的色带不规则，那很难得到纯的产物。

其实不用切割下来，也可以显色，利用滴管在板边缘涂显色剂，然后显色，效果也可以。

产物色带的判断：如果有标样点的话，可以跟标样点TLC检测对照；如果没有标样点的话可以将TLC—LCMS或NMR组合判断；有时在大板展开后，可能会出现像下方第3块板的情况，两条色带距离特别近，不好判别是不是一个东西，造成这种状况的原因可能是过载或受潮，建议大家将两条色带分别刮取后与标点对照来展开判断是不是一个东西，再确定能不能合并。【】

对于一些特殊样品，如烯烃的Z/E构型的分离， 制备薄层色谱可能分离度也不会很高，可以把色带分为三份，中间是可能混合带，上下色带可以得到纯度较高的产物。【】

刮板：判断好色带后，在紫外灯下，用铅笔描好荧光带，开始刮板。带好口罩很重要，小编是用平头雕刻笔刀刮板的，非常好用。另外非常重要的是，在确定得到所需产物之前，不要轻易丢弃制备板。如果需要纯化的样品是最终产物，可以适当的舍弃色带边缘，只刮靠近中间的部分来确保纯度，但是产物量如果不够，可以把舍弃的部分刮下来，进行二次爬板纯化 。如果是中间体，对纯度要求不高，尽量把所有含有目标产物的色带都刮下来确保收率。

洗脱：刮好的硅胶，量少的话，可以隔着称量纸用试管或大天平砝码等硬物擀碎。量多的话，直接装到自封袋里面随便蹂躏，直到成粉末为止。粉末状的硅胶样品的洗脱，大部分人是直接加溶剂泡出来。但小编用的是，把硅胶粉直接装到柱子（有底层砂芯的那种）里，直接像过柱子一样在上层加溶剂压出来，这种方法的好处就是，对于溶解性不好的样品也可以 用相对较少的溶剂洗 快速洗出产品。加入溶剂洗脱的时候可以随时点板看产品是否已经完全洗出。 尽量选择溶解度好并且极性小的溶剂，通常可用二氯甲烷或者乙酸乙酯，如果化合物溶解度较差时，也可选用二氯甲烷：甲醇10：1的混合溶剂进行洗脱，防止溶解过多硅胶，洗脱剂避免加入过多的甲醇。

总之，制备薄层色谱是对于少量样品一种非常实用的纯化方法，如果洗脱彻底的话，损失非常少，而且可以直接看到产物色带操作性更强，一般不会像柱层析那样过丢产物。缺点就是，展开的时间比柱层析更长，对于一些不稳定的产物，在这个过程中可能会坏。

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