研究结果表明,三七提取物有助于增强免疫反应,同时通过调节南美白对虾肠道消化酶的活性来维持生长性能。
三七属于五加科三七属 ,是临床常用的中药材,对水产动物具有促进生长、免疫调节、抗菌等作用,具有提高生长速度、提高免疫力、增强抗病能力的作用。三七中已鉴定出皂苷、聚乙炔、甾醇、黄酮、多糖、环肽、氨基酸等200多种活性成分 。先前的研究表明,三七提取物可增强杂交石斑鱼的生长和抗氧化能力。
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血细胞在虾的免疫系统中发挥着关键作用,执行吞噬、储存和释放酚氧化酶原(proPO)等功能。酚氧化酶 (PO) 主要由 proPO 系统激活,产生具有杀菌特性的黑色素,促进外部伤口愈合并抵御病原体。在吞噬作用过程中,会产生活性氧(ROS),引起呼吸爆发(RB),从而促进吞噬作用和异物清除。此外,胰蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、糜蛋白酶等消化酶是虾肠道内消化和营养吸收的重要指标。这是影响虾的生长和抵抗力的重要因素。
该研究评估了三七提取物 (PNWE)对白对虾免疫反应和消化酶功能的影响。此外,该研究还评估了肠道消化酶的活性和弧菌数量, 并观察了肝胰腺和肠道的组织病理学。
一、研究方法:
平均重量为3.8±0.5g(平均值±SD)的白对虾培养7天,饲喂体重8%的商业饲料(35% 粗蛋白),每天饲喂两次。实验过程中,实验虾(60尾/组)在装有200L海水、盐度为15‰的水槽中饲养;温度24-26°C,pH值7.8-8。
将三七粉末加入无菌水(100g/L)中并在室温下搅拌24小时,然后将混合物离心。收集上清液并通过0.45μm滤膜过滤。滤液蒸发并随后冷冻干燥产生PNWE,产率51.94%。 PNWE样品储存于-80°C。
实验组虾注射不同浓度的三七提取物(PNWE)(50、100和200μg/g虾)。约20μL PNWE,浓度9.5;将19或38mg/mL注射到白虾的第二或第三腹节中,分别达到50、100和200μg/g体重的剂量。对照组给虾注射盐水(20μL)。在每个时间点(12、24、48、72、168和240 h),每组采集10尾虾,分析免疫参数(THC、SGC、GC、HC、PO和RB、PR和PI活性)和肠道消化酶(包括胰蛋白酶、糜蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶)活性以及肠道内弧菌数量。 240小时后取肝胰腺和肠道样本进行组织病理学观察。
二、研究成果
根据显微镜观察结果,注射不同浓度PNWE的虾的GC、SGC和HC在240小时内均未观察到变形或破损。 24-72小时后,注射100和200μg PNWE的虾的THC明显高于对照(p < 0.05);从24-240小时,注射不同PNWE浓度的虾的GC和SGC百分比明显高于对照组(p < 0.05),而HC百分比明显低于对照组(p < 0.05)。在注射100和200µg PNWE 的虾中观察到GC比率增加最多(图1)。
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12-240小时,不同浓度PNWE注射组的吞噬活性(RB)均明显高于对照组。注射100和200µg PNWE 12-48小时后,虾的RB最高。注射不同浓度PNWE的虾在12至240小时内的PR和PI均明显高于对照组。注射100和200 µg PNWE 的组中PI最高。从12-240小时,注射不同浓度PNWE的虾的PO活性明显高于对照组(图2)。
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注射PNWE的虾的胰蛋白酶活性高于对照组虾(p<0.05),其中50和100μg/g虾组在12-48小时内具有最高活性。 12-24小时,注射PNWE的虾胰凝乳蛋白酶活性明显高于对照组,其中50μg/g虾组最高。从12-24小时,注射PNWE的虾的淀粉酶活性明显高于对照组(p<0.05),其中50μg PNWE在12小时时最高。从12-24小时,注射50μg PNWE的虾的脂肪酶活性显着高于对照(p<0.05)。
48小时后,注射100和200 µg/g PNWE虾的肠道内弧菌数量明显低于对照组(p < 0.05)。
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三、结论:
三七提取物通过增加HC、PO、RB和吞噬细胞活性来增强白虾的免疫反应,同时通过调节肠道消化酶(胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶)的活性来维持生长性能。 PNWE是一种很有前景的虾类免疫调节剂,有潜力促进未来水产养殖业的可持续发展。
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