Cyanine7 TSA，花菁染料Cy7酪胺偶联物实验注意事项与技术原理

英文名称：Cy7-TSA，Cyanine7 Tyramide，Cy7-Tyramide，Cyanine7 TSA

中文名称：花菁染料Cy7酪胺偶联物

分子式：C49H66N4O8S2

分子量：903.20

性状：深绿色至黑色固体

结构式：

一、技术原理

TSA 技术本质上是一种酶介导的活性染料沉积方法。当体系中存在与目标特异性结合的辣根过氧化物酶（HRP）时，在过氧化氢存在下，HRP 催化惰性的 Cy7-酪酰胺底物转化为具有高度活性的中间体。该活性中间体可在 HRP 所在位点附近（约几纳米至几十纳米半径内），与富电子氨基酸残基发生共价结合，从而实现荧光信号在原始信号位点的原位沉积与积累。由于单个酶分子在短时间内可催化大量酪酰胺分子沉积，因此能实现信号的有效放大。

二、Cy7 染料的特性

Cy7 是一种花菁类荧光染料，其激发和发射波长位于近红外区域。主要特性包括：

较低的背景干扰：生物样本的自发荧光在此波段通常较弱，有助于提升信噪比。

较强的组织穿透能力：近红外光在生物组织中的散射和吸收相对较少，更适合较厚样本的成像。

适用于多色标记：其光谱与可见光区染料（如 FITC、Cy3）及远红外染料分离度较好，便于进行多重检测。

三、 主要应用优势

信号放大能力：相较于直接的免疫荧光法，TSA 技术可显著增强微弱信号的强度，提高检测的灵敏度。

空间分辨率保持：信号沉积被限制在酶活位点附近，能较好保留原始目标的空间定位信息。

多重检测兼容性：通过顺序进行多轮 HRP 标记、TSA 反应与 HRP 灭活步骤，可在单一样本上实现多个目标的高重多次检测，且光谱串扰较低。

适用性广：该技术可与多种基于 HRP 的检测体系联用，例如免疫组织化学、原位杂交等。

四、实验注意事项

反应条件优化：过氧化氢浓度、酪酰胺反应时间需进行优化。浓度过高或时间过长可能导致背景增强或信号扩散。

酶的彻底灭活：在进行多轮 TSA 实验时，前一轮的 HRP 必须通过适当方法完全灭活，以防止后续非特异性沉积。

试剂稳定性：Cy7-酪酰胺对光敏感，应避光保存和使用。建议分装保存于低温干燥环境，避免反复冻融。

样本处理：某些固定剂或处理过程可能影响内源性过氧化物酶活性，需根据样本类型设置对照实验。

五、与其他方法的比较

与直接标记抗体或通过生物素-亲和素系统放大的方法相比，Cy7-TSA 在信号放大倍数和多重检测潜力方面具有特点。直接标记法简单但灵敏度有限；生物素-亲和素系统虽有放大，但可能因内源性生物素而产生背景。TSA 技术提供了另一种高灵敏度的路径，但其多步骤流程需要更细致的条件控制。

总结而言，Cy7-TSA 是一种基于酶促沉积原理的近红外信号放大工具。它通过将 Cy7 染料的近红外光学优势与 TSA 技术的高灵敏度相结合，为研究人员在复杂样本中进行低丰度目标检测或多重空间分析提供了一种有效的技术选项。其应用效果依赖于严谨的实验设计和条件优化。

以上由WWH编辑提供的试剂信息，仅供参考，不作为具体的实验方案、操作步骤或使用承诺。实际实验步骤与条件需由研究人员根据自身实验体系、目的及相关安全规范，独立进行设计、优化与验证。