流感疫苗生产中MDCK宿主细胞DNA（rHCD）残留检测体系构建

流感是由流感病毒引起的对人类健康危害较重的呼吸道传染疾病，全球每年有数百万人感染.。在现今新冠疫情持续流行的情况下，可能存在新冠及流感等呼吸道传染病叠加流行的风险，疫苗接种仍是预防流感的主要手段。

目前市面上90%的流感疫苗依靠鸡胚生产，存在生产过程设备复杂、周期长、产量受限等弊端。随着动物细胞大规模培养技术的发展及完善，细胞基质疫苗已展现出明显的优势，流感疫苗的生产已从传统的鸡胚生产逐步向细胞基质生产转变。

一、流感疫苗常用生产细胞系

基于动物细胞培养技术的流感病毒疫苗生产工艺中所用的细胞大致可分为3类，即原代细胞（如PMK）、双倍体细胞（如WI-38、MRC5）和适于连续培养的永生或转化细胞系（如Vero、MDCK等）。与其他动物细胞系相比，MDCK细胞具有显著的优势：

• MDCK细胞干扰素系统的无效性提高了病毒复制率，在相同时间内MDCK细胞的增殖病毒滴度明显高于其他细胞系。
• 因流感病毒在MDCK中复制速度快、传代时间短，使病毒变异率明显降低，且仅添加1次胰酶即可保证病毒的有效增殖，避免了额外的污染。
• MDCK细胞从有血清转为无血清培养时，因其表现出低敏感性，容易适应无血清培养和驯化悬浮培养，更适合通过大型生物反应器规模化生产。
• 体外研究数据表明，MDCK细胞衍生的成分不具有过敏源性。

参考文献：

Cell culture-based influenza vaccines: A necessary and indispensable investment for the future

二、MDCK流感疫苗现状

国际上已有多个MDCK细胞基质流感疫苗批准上市，如Novartis Vaccines生产的Optaflu®三价流感亚单位疫苗（已被Seqirus收购）、AstraZeneca旗下美国医学免疫公司生产的Flumist®四价减毒活疫苗等。

已获批上市的MDCK细胞培养流感疫苗

国内至今未有自主研发的MDCK细胞基质流感疫苗正式获批上市。根据国家药监局网站和疫苗批签发信息显示，目前供应的国产流感疫苗均为鸡胚培养疫苗。2022年5月，国产MDCK细胞悬浮培养流感疫苗进入临床申报阶段，系国内首次。

三、MDCK HCD检测法规要求

国内外监管机构对于疫苗中的DNA残留量和残留片段的大小分布等有强烈的关注。针对不同宿主细胞、给药方式和频率，一般允许的宿主残留DNA含量在100 pg~10 ng/剂之间。对于残留DNA的最大可承受量为10 ng/剂，对于DNA大小片段的要求则为小于一个功能基因的长度。国家药监局药审中心发布的《体内基因治疗产品药学研究与评价技术指导原则（试行）》中明确建议HCD残留片段大小控制在200bp以内。

MDCK细胞作为宿主工程细胞，其宿主DNA残留将对机体产生安全性风险。尽管在MDCK细胞基质流感疫苗生产过程中已有残留DNA的去除工艺，包括采用超滤、核酸酶处理、层析、β-丙内酯灭活等方法，但疫苗产品中仍有可能残留宿主DNA及其片段。因此，为控制疫苗质量，需要对疫苗中MDCK宿主细胞残留DNA及其片段进行监测。

四、MDCK流感疫苗的HCD监控

基于目前市场上以MDCK作为生产细胞系开发的流感疫苗，湖州申科生物技术有限公司推出了MDCK残留DNA检测试剂盒及MDCK残留DNA片段分析检测试剂盒，助力相关疫苗企业对MDCK流感疫苗的HCD进行全过程监控。

1、SHENTEK®MDCK残留DNA检测试剂盒

试剂盒有效针对生物制品中微量的MDCK宿主细胞残留DNA进行定量检测。

2、SHENTEK®MDCK残留DNA片段分析检测试剂盒

试剂盒有效针对生物制品中微量的MDCK宿主细胞残留DNA进行片段大小分析检测，含有高灵敏度、高特异性的检测试剂。

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