Calbryte 520的反应效率与选择性

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产品名称：Calbryte 520的反应效率与选择性
1. 反应效率：高灵敏度与快速响应
荧光增强特性：Calbryte 520 AM（乙酰氧甲基酯形式）在结合钙离子（Ca²⁺）时，荧光强度可提升超过100倍，信噪比（SNR）显著优于传统探针如Fluo-4 AM。例如，在CHO-K1细胞实验中，其信噪比是Fluo-4 AM的2-3倍，能更清晰地捕捉微小的钙信号波动（如神经元动作电位或药物刺激引发的钙瞬变）。
动态响应范围：解离常数（Kd）约为320 nM，适合检测快速、高幅度的钙浓度变化，避免高亲和力染料（如Fura-2）的饱和问题，同时支持低钙浓度（如亚细胞器钙释放）的精确检测。
细胞内保留效率：AM酯形式可高效穿透细胞膜，被细胞内酯酶水解后转化为亲水性荧光探针，细胞内保留时间长达24小时，无需添加丙磺舒（传统探针常需添加以减少泄漏），避免丙磺舒的副作用（如干扰细胞代谢）。
快速负载与成像：37℃孵育30-60分钟即可完成细胞负载，兼容共聚焦显微镜、流式细胞术及高通量筛选设备（如FDSS、FLIPR），支持高时空分辨率成像（如双光子显微镜的100-1000 fps记录）。
2. 选择性：对钙离子的特异性结合
高选择性结合：基于BAPTA结构，对Ca²⁺具有高亲和力（Kd ~320 nM），特异性优于其他金属离子（如Mg²⁺、Zn²⁺），减少非特异性干扰，确保检测准确性。
光谱兼容性：激发波长490 nm，发射波长520 nm，适配常规FITC滤光片系统，与绿色荧光蛋白（GFP）、红色荧光探针（如Rhod-2 AM）及线粒体染料（如R-CEPIA1SR）光谱重叠少，支持多色成像（如钙信号与膜电位、线粒体钙的同步监测）。
低背景噪声：静息钙水平下荧光极低，结合Ca²⁺后荧光显著增强，背景干扰小，适合长时间成像（如24小时）及低钙浓度检测，避免自发荧光干扰。
pH与温度稳定性：在生理pH（6.5-8.0）及温度（25-40℃）范围内荧光信号稳定，避免因代谢酸化或温度波动导致的假阳性。
3. 应用优势与实验设计
生物医学应用：广泛用于神经元活动（如动作电位、神经递质释放）、心肌细胞钙振荡、免疫细胞激活（如T细胞、巨噬细胞）、药物筛选（如GPCR和钙通道靶标的高通量筛选）及肿瘤治疗研究（如电磁场对钙信号的影响）。
实验兼容性：兼容多种细胞类型（如原代细胞、干细胞、肿瘤细胞），对细胞毒性低，适合难转染细胞（如原代神经元）。负载条件优化（如含Pluronic F-127的缓冲液）可增强疏水性AM酯的溶解性，提高负载效率。
多通道与长时程成像：支持双通道/多通道成像（如钙信号与膜电位、线粒体钙的同步监测），以及长时程钙信号记录（如昼夜节律、药物长期效应评估）。

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