《食品科学》：延边大学沈明花教授等：基于巨噬细胞炎症模型探讨榆干离褶伞溶栓酶的抗炎作用

当外源性病原体或内源性损伤因素刺激机体时，激活机体的固有免疫系统，引起非特异性的防御反应。单核细胞、巨噬细胞等固有免疫细胞受到刺激后，释放炎症介质，激活炎症反应。当致炎因素持续存在时引起组织损伤，导致多种疾病。促炎因子可诱发大量活性氧（ROS）的生成，进一步引发细胞的氧化损伤。

榆干离褶伞（

Lyophyllum ulmarium

）又名大榆蘑，属担子菌门、离褶伞属，主要分布在东北、华北等地，具有丰富的营养及药用价值。榆干离褶伞溶栓酶（LUFE）作为榆干离褶伞的一种活性成分，具有溶栓、抗炎、抗氧化应激等多种生物活性。

基于LUFE的多种功效及巨噬细胞在炎症反应中的重要作用，延边大学医学院的苏新、张晴、沈明花*等以脂多糖（LPS）建立巨噬细胞炎症模型，探究榆干离褶伞溶栓酶对巨噬细胞炎症反应的作用及相关机制，旨在为榆干离褶伞的功能活性开发提供理论基础。

1 LUFE对细胞炎性因子水平的影响

炎症反应发生时，巨噬细胞合成、释放一系列炎性因子，如IL-1β、IL-6及MCP-1等。如表1所示，与正常对照组相比，LPS作用后细胞的IL-1β、IL-6及MCP-1水平极显著升高（

P

＜0.01）；与LPS组相比，LPS＋LUFE-L组与LPS＋LUFE-H组IL-1β、IL-6及MCP-1水平极显著降低（

P

＜0.01）；与LPS＋LUFE-L组相比，LPS＋LUFE-H组IL-1β水平极显著降低（

P

＜0.01）。上述结果表明LUFE可通过降低炎性因子水平，减轻LPS所致的巨噬细胞炎症反应。

2 LUFE对细胞炎症通路相关蛋白表达水平的影响

如图1所示，与正常对照组相比，LPS组TLR4、MyD88、p-NF-κB/NF-κB蛋白水平显著上升（

P

＜0.01或P＜0.05）；与LPS组相比，经LUFE干预后极显著下调上述蛋白的表达水平或磷酸化水平（

P

＜0.01）；与LPS＋LUFE-L组相比，LPS＋LUFE-H组MyD88、p-NF-κB/NF-κB蛋白表达水平显著降低（

P

＜0.05或P＜0.01），说明LUFE可能通过调控TLR4/MyD88/NF-κB信号通路调控LPS诱导的J774A.1细胞炎症反应，且存在一定剂量效应关系。

3 LUFE对J774A.1细胞趋化作用的影响

通过细胞迁移实验观察了LUFE对J774A.1细胞趋化作用的影响。以LPS作为巨噬细胞趋化的诱导剂，观察各组细胞迁移数量，并计算趋化指数。结果表明，与正常对照组相比，LPS刺激后细胞趋化能力明显增强（

P

＜0.01）；与LPS组相比，LPS＋LUFE-L组与LPS＋LUFE-H组细胞趋化指数极显著降低（

P

＜0.01）（图2），但两者之间无显著差异。提示LUFE能够减弱巨噬细胞趋化作用。

4 LUFE对J774A.1细胞黏附功能的影响

巨噬细胞的黏附是细胞聚集于炎症部位的重要环节。通过细胞与细胞外基质黏附实验观察了LUFE对J774A.1细胞黏附功能的影响。如图3所示，与正常对照组相比，LPS组细胞黏附功能明显增强（

P

＜0.01）；与LPS组相比，LPS＋LUFE-L组与LPS＋LUFE-H组细胞黏附功能极显著减弱（

P

＜0.01），但两者之间无显著差异。表明LUFE可以降低巨噬细胞的黏附功能，抑制巨噬细胞在病变部位的聚集。

5 LUFE对J774A.1细胞吞噬功能的影响

利用中性红吞噬实验观察了巨噬细胞的吞噬能力。结果表明，与正常对照组相比，LPS组细胞吞噬功能明显增强（

P

＜0.01）；与LPS组相比，LPS＋LUFE-L组与LPS＋LUFE-H组细胞吞噬功能极显著减弱（

P

＜0.01）（图4），但两者之间无显著差异。提示LUFE可以降低J774A.1细胞的吞噬水平，抑制LPS诱导的巨噬细胞的活化。

6 LUFE对细胞ROS水平的影响

炎症过程中可以产生大量的ROS，进而促进炎症反应，形成恶性循环。如图5所示，与正常对照组相比，LPS组细胞ROS水平极显著升高（

P

＜0.01）；与LPS组相比，LUFE干预后ROS水平极显著降低（

P

＜0.01），但两个剂量组间无显著差异。提示LUFE可以降低细胞ROS水平，抑制氧化应激，缓解炎症反应的进一步发展。

7 LUFE对细胞SOD、CAT活性及MDA含量的影响

为了观察LUFE对LPS刺激后J774A.1细胞氧化应激相关指标的影响，检测了细胞SOD、CAT及MDA水平。如表2所示，LPS刺激后明显降低了细胞SOD、CAT活性，升高MDA含量（

P

＜0.01）；给予不同质量浓度LUFE干预后细胞SOD、CAT水平均显著升高，MDA水平均显著降低（

P

＜0.01），不同质量浓度LUFE对细胞SOD、CAT活性及MDA含量的影响无显著差异。说明LUFE可提高抗氧化酶活性，抑制脂质过氧化，缓解细胞的氧化应激损伤。

8 LUFE对Nrf2、Keap-1、HO-1及NQO1蛋白表达水平的影响

如图6所示，与正常对照组相比，LPS组Nrf2、HO-1、NQO1及核Nrf2蛋白表达水平显著降低，Keap-1表达水平显著升高（

P

＜0.05，

P

＜0.01）；与LPS组相比，LPS＋LUFE各剂量组Nrf2、HO-1、NQO1及核Nrf2表达水平明显升高，Keap-1表达水平显著降低（

P

＜0.05，

P

＜0.01）；与LPS＋LUFE-L组相比，LPS＋LUFE-H组Nrf2、HO-1、NQO1及核Nrf2表达水平显著升高，Keap-1表达水平极显著降低（

P

＜0.01）。这表明LUFE可能通过调控Nrf2信号通路，影响巨噬细胞的抗氧化应激水平，且存在一定剂量效应关系。

9 ML385作用后LUFE对Nrf2、HO-1及NQO1蛋白表达的影响

为了进一步探究LUFE对J774A.1细胞的影响是否通过Nrf2及其下游相关蛋白水平所介导，加入Nrf2的抑制剂ML385后观察了LUFE对Nrf2、HO-1、NQO1表达水平的影响。如图7所示，与LPS组相比，LPS＋ML385组Nrf2、HO-1、NQO1及核Nrf2的表达水平极显著降低（

P

＜0.01）；与LPS＋ML385组相比，LPS＋LUFE-H＋ML385组细胞Nrf2、HO-1、NQO1及核Nrf2的表达水平极显著升高（

P

＜0.01）。这证实了LUFE通过调控Nrf2信号通路发挥相应作用。

10 ML385作用后LUFE对J774A.1细胞IL-6、TNF-α水平的影响

为探究LUFE是否可以通过调节Nrf2的水平影响炎性因子的水平，分析ML385作用后各处理组细胞IL-6、TNF-α水平的变化规律。如图8所示，与LPS组相比，LPS＋ML385组细胞IL-6、TNF-α水平极显著升高（

P

＜0.01）；与LPS＋ML385组相比，LPS＋LUFE-H＋ML385组细胞IL-6、TNF-α水平极显著降低（

P

＜0.01）。说明LUFE可通过调控Nrf2抗氧化途径降低炎性因子水平。

11 ML385作用后LUFE对TLR4、MyD88及NF-κB蛋白表达水平的影响

为了探究LUFE是否通过调控Nrf2影响TLR4/MyD88/NF-κB信号通路，利用Nrf2抑制剂ML385处理并观察TLR4、MyD88及NF-κB蛋白表达水平变化情况。如图9所示，与LPS组相比，LPS＋ML385组细胞TLR4、MyD88、NF-κB蛋白表达水平明显升高（P＜0.01）；与LPS＋ML385组相比，LPS＋LUFE-H＋ML385组细胞TLR4、MyD88、NF-κB蛋白表达水平明显下降（P＜0.01）。这说明LUFE可以通过激活Nrf2信号通路影响TLR4、MyD88及NF-κB的表达，抑制炎症反应。

结论

本研究基于巨噬细胞的炎症模型探讨LUFE的抗炎作用，结果表明，LUFE通过下调TLR4/MyD88/NF-κB信号通路相关蛋白表达，降低炎性因子水平，抑制巨噬细胞的功能，减轻炎症反应。LUFE还可以上调Nrf2信号通路相关蛋白表达，提高抗氧化酶水平，减轻氧化应激损伤，并通过调节Nrf2抑制TLR4/NF-κB信号通路发挥抗炎作用，但LUFE干预后Nrf2与TLR4通路之间的具体作用机制仍有待进一步研究。

本文《基于巨噬细胞炎症模型探讨榆干离褶伞溶栓酶的抗炎作用 》来源于《食品科学》2025年46卷第20期199-207页，作者：苏新, 张晴, 王佳怡，沈明花 *。DOI:10.7506/spkx1002-6630-20250520-128 。点击下方 阅读原文 即可查看文章相关信息。

实习编辑：杨琼；责任编辑：张睿梅。点击下方阅读原文即可查看全文。图片来源于文章原文及摄图网