铁死亡的多维度检测方法与策略

要确证铁死亡的发生并深入探究其机制，需要一套系统、多维度的检测策略。根据其定义和特征，铁死亡的检测主要围绕“铁积累”、“脂质过氧化”和“抗氧化系统崩溃”这三个核心环节展开，可分为以下几类方法：

1. 细胞活性与代谢检测：这是最直接的证据链。首先，可以使用CCK-8、MTT等方法评估细胞活力下降，确认细胞状态改变。核心检测包括：

• 铁离子水平：使用特异性荧光探针（如PGSK）通过流式细胞术或荧光显微镜检测细胞内Fe²⁺的积累，或使用Iron Assay Kit进行生化定量。
• 脂质过氧化与ROS：使用C11-BODIPY 581/591、LiperFluo等探针动态检测脂质ROS；使用经典的硫代巴比妥酸反应物法（TBARS）定量检测终产物丙二醛（MDA）的含量。
• 谷胱甘肽代谢系统：检测GSH、GSSG、总谷胱甘肽（T-GSH）含量以及GSH/GSSG比值，评估抗氧化能力；检测谷胱甘肽过氧化物酶（GPX）谷胱甘肽还原酶（GR）等关键酶的活性。

2. 形态学观察：

• 透射电镜（TEM）：是观察铁死亡特征性线粒体形态变化（皱缩、嵴消失、膜密度增高）的“金标准”。
• 线粒体膜电位检测：使用JC-1等探针，通过流式细胞术或荧光显微镜分析线粒体膜电位的变化，作为功能受损的辅助指标。

3. 分子水平检测：

• Western Blot / qPCR：检测铁死亡关键调控蛋白和基因的表达变化，如GPX4、SLC7A11（下调）、ACSL4、PTGS2/COX-2（上调）等，从分子机制层面提供证据。

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