乳酸脱氢酶(LDH)释放法被广泛用于评估细胞毒性。然而,将其结果简单等同于“细胞死亡率”可能过于粗略。LDH释放量强烈依赖于损伤的类型和检测的时间点,它是一个动态过程,而非静态 snapshot。
不同细胞死亡方式具有独特的膜完整性丧失动力学。典型的坏死性损伤(如高浓度过氧化氢处理)会迅速破坏细胞膜,导致LDH在短时间内(几小时内)大量释放。而凋亡过程在早期阶段膜保持完整,LDH释放很少;直到次级坏死阶段,LDH才显著释放,这通常发生在凋亡诱导后的较晚时间(如24小时以后)。焦亡等其他程序性死亡方式也有其特定的时间窗口。因此,仅在单一时间点(如24小时)检测LDH,可能错过早期坏死信号,或低估早期凋亡事件。
![]()
实验设计必须包含动态时间点监测。对于作用机制未知的化合物,建议在处理后4、8、12、24小时等多个时间点取样检测。绘制LDH释放的时间动力学曲线,能更准确地反映损伤模式和作用速度。
对照组的设置是数据解读的生命线。实验必须设立三个基础对照:
1)背景对照(仅培养基),用于校正仪器本底;
2)自发释放对照(细胞+培养基,无处理),反映正常细胞的基线释放水平;3)最大释放对照(细胞+培养基+裂解液),代表100%细胞裂解释放的LDH总量。专业的LDH检测试剂盒会充分考虑这些需求。例如,在Abbkine的LDH细胞毒性检测试剂盒中,即配备了经过验证的细胞裂解液作为最大释放对照,并提供了详细的计算公式,帮助研究者准确评估细胞毒性百分比,这对于获得可靠且可比的数据至关重要。反应后,溶液颜色的稳定性时间也需要留意,在规定时间内完成读数。
特别声明:以上内容(如有图片或视频亦包括在内)为自媒体平台“网易号”用户上传并发布,本平台仅提供信息存储服务。
Notice: The content above (including the pictures and videos if any) is uploaded and posted by a user of NetEase Hao, which is a social media platform and only provides information storage services.