动物模型构建与评估丨三叉神经痛（TN）小鼠模型构建与Von Frey测试方法总结

三叉神经痛（TN）小鼠模型通过单侧眶下神经慢性缩窄损伤建立。小鼠麻醉后，仰卧固定于手术垫上并暴露口腔；在左侧腭颊黏膜作一长约0.5 cm的切口，经钝性分离显露三叉神经的眶下神经分支，随后用4.0号肠线结扎该神经，并在结扎点远端切除约1 mm的神经段。

Fig1 Von Frey测试示意图 （可根据需要结合光遗传学等）

Von Frey测试

Von Frey测试是一种用于评估小鼠和大鼠机械性异常性疼痛的方法。

在该测试中，动物被单独放置于底部为金属网或其它可穿透材质的小笼中。实验者将一根单丝纤维垂直施加于后足底面，直至其弯曲，从而施加一个恒定且预先确定的力，持续2–5秒。若动物在刺激过程中或刚移除纤维后表现出任何伤害性防御行为，如迅速缩回足部、舔舐或甩动足部，则视为阳性反应。虽然最常测试的区域是后足底面，但也可测试身体其他部位，例如后足背侧或腹部。

目前有多种方法利用手动Von Frey测试评估机械敏感性，包括“上下法”（up-down method）、“递增刺激法”（ascending stimulus method）和“百分比反应法”（percent response method），应用最多主要是“上下法”。

“上下法”用于确定引起50%动物出现足部撤回反应所需的机械力，其计算基于用于确定半数致死剂量（LD50）的统计公式。实验从一根预估接近50%撤回阈值的纤维开始：若无反应，则换用更高力度的下一根纤维；若有反应，则换用更低力度的纤维。如此交替进行，直到首次方向改变后至少获得四次读数，并记录整个反应序列（“−”表示无反应，“+”表示有反应）。为准确计算50%阈值，通常需要围绕估计阈值获得至少六次反应。

50%阈值的计算公式为：

50% 阈值（克） = 10 (X + k·d) / 10⁴

其中：

X = 最后一次使用的Von Frey纤维的对数值（log单位）

k = 根据反应模式查表所得的系数

d = Von Frey纤维间力度增量的平均对数值（log单位）

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行为学测试方法

常用von Frey轻触三叉神经支配区域（如胡须垫），记录动物因疼痛而迅速甩头、抓脸或躲避的反应。

机械撤回阈值测试（50% withdrawal threshold）：

使用8根力度范围为0.007–6.0 g的Von Frey纤维丝垂直施加于后足底内侧表面，直至纤维轻微弯曲。若小鼠在4秒内迅速缩回足部，视为阳性反应。采用“上下法”（up–down method）计算50%机械撤回阈值。

在三叉神经痛的研究中，“withdrawal frequency”（撤回频率）通常是指实验动物在接受面部机械或热刺激后，快速缩回头部、面部或胡须垫的次数或比例，用于量化其疼痛敏感性或痛觉过敏的程度。

撤回频率测试（withdrawal frequency test）：

选用6根特定力度的纤维丝（0.07、0.16、0.4、1.0、1.4 和 6.0 g），同样垂直施加于后足底内侧，每根纤维施加1秒，重复5次。阳性反应定义为足部对刺激的快速、即时撤回。记录每次刺激的反应，并计算每根纤维引发撤回反应的频率（即阳性次数/5次）。

Withdrawal frequency =（出现撤回反应的次数/总刺激次数）× 100%，频率越高，说明动物对刺激越敏感，提示疼痛样行为增强。

在三叉神经痛模型（如慢性压迫三叉神经根、炎症或神经损伤模型）中，withdrawal frequency会显著升高；而有效镇痛药物处理后，该频率会下降。

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