动物模型构建与评估丨啮齿动物慢性酒精中毒性脑病模型

慢性酒精中毒性脑病造模（chronic alcoholic brain injury model）是长期过量饮酒导致的进行性脑功能障碍，主要表现为认知下降、情绪障碍、运动失调及神经退行性改变，模拟人类长期过量饮酒所导致的脑损伤过程。是研究酒精相关神经损伤、认知障碍和脑萎缩的重要手段。该模型选用对酒精敏感且行为反应接近人类的C57BL/6J小鼠，结合饮酒加灌胃的方式（酒精饮水+每日两次稀释白酒灌胃）并在前两周采用剂量递增策略以提高耐受性。

实验步骤

将56°白酒稀释为5%（v/v）和28%（v/v）两个浓度。模型组小鼠在饮用含5%（v/v）酒精的水作为唯一水源的基础上，每日进行28%（v/v）酒精的灌胃给药。前两周采用剂量递增方式，灌胃量从0逐步增加至6 g/kg体重，随后4周维持该剂量；对照组小鼠饮用不含酒精的水并灌胃等体积的生理盐水。

完成为期6周的造模后，所有小鼠依次进行Y迷宫、Morris水迷宫、爬杆实验和平衡木实验等认知与运动行为学检测，各项实验间间隔1～3天，以确保动物充分休息。

行为评估

Y迷宫实验

Y迷宫实验用于评估小鼠的空间工作记忆能力。迷宫由三个长度均为40 cm、宽10 cm、高20 cm的臂组成，三臂以120°夹角从中心区域向外辐射。实验时，将小鼠置于中心区，允许其在8分钟内自由探索三个臂。记录其进入各臂的总次数及进入顺序。空间工作记忆通过“交替百分比”进行评估，而总进入次数则反映小鼠的自发活动水平。

Morris水迷宫实验

Morris水迷宫实验用于检测小鼠的空间学习与记忆能力。实验装置为一直径125 cm、高75 cm的圆形水池，内壁涂黑，注入（23±2）℃的自来水。池中设一隐藏平台，直径9 cm，位于第一象限，距池壁30 cm，平台表面低于水面0.7 cm。实验包括1天环境适应、1天可见平台训练（定位航行训练前期）、连续5天隐藏平台训练（定位航行）以及1天平台移除后的空间探索测试。每天进行3次训练，小鼠从不同象限入水，记录其在90秒内找到平台的潜伏期，若未找到则引导其上平台并停留15秒。空间探索阶段记录小鼠在60秒内的游泳路径。通过ANY-maze™系统采集数据，主要指标包括平均逃避潜伏期、游泳速度、穿越平台位置的次数、在目标象限的停留时间等，综合评估空间记忆能力。

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平衡木实验

平衡木实验用于评估小鼠的运动协调与平衡能力。实验装置为一根长100 cm、直径1.8 cm的圆木棒，两端由60 cm高的支架支撑，保持水平。木棒一端连接一个黑色塑料笼，作为小鼠的终点目标。实验前，对小鼠进行训练，使其从一端爬行至另一端的笼中并停留15秒，每只训练6次。正式测试时，记录小鼠完整通过平衡木所需的时间，时间越短表明其运动协调与平衡能力越强。

爬杆实验

爬杆实验用于评估小鼠的肌肉耐力与运动协调性。实验使用一根长50 cm、直径1.2 cm的圆木棒，固定于45°倾斜角度。将小鼠置于杆顶，引导其在15秒内爬至杆底，每只小鼠先进行4次训练。正式测试时，记录小鼠从杆顶爬到底部所需的时间，作为其运动协调和肌肉控制能力的指标。爬行时间越短，表明运动功能越好。

步态分析（Gait Analysis）

运动与协调功能评估还可使用足迹法或数字化步态系统分析行走模式。

指标：步长、步宽、支撑时间等，反映神经肌肉功能。

通过行为学结合脑组织病理学评估，模型组小鼠出现体重增长减缓、空间工作记忆与认知功能下降、运动协调障碍及海马神经元损伤，与临床慢性酒精中毒性脑病患者的早期表现高度相似， 提示模型成功。

系统推荐

该模型在表面效度（症状相似性）和结构效度（致病过程模拟）方面表现良好，具有操作简便、成本低、稳定性高、周期短等优势。还可根据需要进行更全面地评估酒精对认知、情绪、运动及奖赏系统的多维度影响，提升模型的表型深度和临床相关性。

文献引用：

• 蔡瑜,王璐婉,谢冬琳,等.小鼠慢性酒精中毒性脑损伤模型的建立[J].中国比较医学杂志,2023,33(11):71-77.

• Shang P, Lindberg D, Starski P, Peyton L, Hong SI, Choi S, Choi DS. Chronic Alcohol Exposure Induces Aberrant Mitochondrial Morphology and Inhibits Respiratory Capacity in the Medial Prefrontal Cortex of Mice. Front Neurosci. 2020 Oct 22;14:561173. doi: 10.3389/fnins.2020.561173. PMID: 33192248; PMCID: PMC7646256.

• Holloway KN, Douglas JC, Rafferty TM, Kane CJM, Drew PD. Ethanol Induces Neuroinflammation in a Chronic Plus Binge Mouse Model of Alcohol Use Disorder via TLR4 and MyD88-Dependent Signaling. Cells. 2023 Aug 21;12(16):2109. doi: 10.3390/cells12162109. PMID: 37626919; PMCID: PMC10453365.

• Borgonetti V, Roberts AJ, Bajo M, Galeotti N, Roberto M. Chronic alcohol induced mechanical allodynia by promoting neuroinflammation: A mouse model of alcohol-evoked neuropathic pain. Br J Pharmacol. 2023 Sep;180(18):2377-2392. doi: 10.1111/bph.16091. Epub 2023 May 11. PMID: 37050867; PMCID: PMC10898491.

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