ATTO 633 Acid，ATTO 633-羧酸的优势与局限性

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产品名称：ATTO 633 Acid，ATTO 633-羧酸的优势与局限性
应用领域
生物标记与成像：
蛋白质/抗体标记：用于免疫荧光、流式细胞术（FACS）、荧光原位杂交（FISH），实现高灵敏度检测。
核酸标记：标记DNA/RNA的氨基修饰末端，适用于基因检测与细胞成像。
超分辨率显微镜：高光稳定性支持PALM、dSTORM、STED等技术，实现单分子级分辨率。
活体成像：远红光特性减少生物组织自发荧光干扰，适用于小动物活体成像及深层组织穿透。
多重荧光系统：
发射波长与绿色/红色染料（如Cy5）形成光谱分离，支持多色成像实验，提升检测多维性。
合成与操作流程
合成路径：
染料核心构建：基于罗丹明或类似结构，通过芳香胺缩合、环化、氧化等步骤形成共轭体系。
羧基引入：在染料末端或侧链引入-COOH，通过酯化/水解或直接合成含羧基衍生物。
纯化：硅胶柱层析、反相HPLC分离，纯度≥95%，经MS、NMR、UV-Vis/荧光光谱验证结构。
活化与标记：
羧基活化：EDC/NHS体系（摩尔比1:1.2:1.2）室温避光反应2-4小时，生成活性酯。
标记条件：pH 8.0-9.0缓冲液（如碳酸氢钠），4℃避光反应2小时；核酸标记需氨基修饰末端，巯基标记需转化为马来酰亚胺衍生物。
储存：避光、干燥、-20℃保存，避免反复冻融，现配现用以保持活性。
优势与局限性
优势：
高灵敏度与低背景：远红光发射避开生物自发荧光，提升信噪比。
化学修饰灵活：羧基可转化为NHS酯、马来酰亚胺等，适配多种偶联需求。
生物相容性：中等亲水性，适合生理环境，减少非特异性结合。
局限性：
合成复杂度：多步反应需精确控制条件，纯化难度大，成本较高。
操作要求：活化/标记需严格避光、低温，避免荧光淬灭或副反应。
稳定性挑战：羧基易氧化分解，储存需惰性环境，长期稳定性需验证。

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