一份WIPO(世界知识产权组织)专利文件,涉及辉瑞公司(Pfizer)开发的一类新型STAT6抑制剂化合物及其医药用途。
一、作用机制:
靶点:STAT6(信号转导与转录激活因子6)
机制:抑制STAT6信号通路,阻断IL-4/IL-13介导的免疫反应,适用于Th2型炎症性疾病。
二、适应症范围
三、BioAuxiliumCCL17/TARC Kit应用
BioAuxiliumTHUNDER TR-FRET CCL17/TARC 试剂盒在该专利中被用来检测血液样本,具体操作原文阐述如下:
将待测化合物溶于DMSO,配制11个浓度梯度(三倍稀释,复孔),384孔V型聚丙烯板每孔上样80nl。采集健康志愿者外周静脉血,加入肝素抗凝(每50ml血加入714单位肝素)。每孔加入60 μl全血,37°C预孵育2小时。每孔加入20μl含10ng/mL IL-13的HBSS缓冲液(含Ca²⁺/Mg²⁺),模拟Th2型炎症反应。37°C继续培养48小时,促进CCL17分泌。1500rpm离心7分钟,取16 μl上清转移至检测板。使用BioAuxilium CCL17 TR-FRET试剂盒,避光室温孵育16小时。酶标仪检测665nm/615 nm荧光比值(TR-FRET信号)。
图:专利BioAuxilium CCL17/TARC应用原文展示
THUNDER细胞因子检测是基于双抗体夹心法,标记荧光供体和受体的CCL17抗体Eu-Ab1和FR-Ab2,分别与细胞上清中CCL17结合,产生能量共振转移FRET(615nm),进而产生665nm荧光信号,荧光信号强度与CCL17浓度成正比。全程仅需1h,免洗ELISA。检测灵敏度高,上限宽,检测范围:2.4-30,000pg/ml
图:THUNDER human CCL17检测原理及流程
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