in vivo CAR-T：慢病毒还是tLNP？

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在当前in vivo CAR-T疗法的赛道上，技术主要分为慢病毒和LNP，可谓一时瑜亮。到目前为止，2025年内已经产生了三个重磅的in vivo CAR-T疗法的交易。

三月份，阿斯利康10亿美元收购EsoBiotec

六月份，艾伯维21亿美元收购Capstan Therapeutics

八月份，吉利德旗下公司Kite宣布以3.5亿美元收购in vivo CAR-T开发公司Interius BioTherapeutics

这三家也不例外：EsoBiotec和Interius是慢病毒，Capstan是靶向型LNP（tLNP）。同样都是MNC对in vivo CAR-T的biotech公司的收购，价格也都差不多，所以本期把这三个公司的技术做个比较，以EsoBiotec的慢病毒和Capstan的tLNP为例。

EsoBiotec

他们主打的特点就是现货型疗法，可以免疫耐受和规模化生成。

技术层面，EsoBiotec构建了第三代的ENaBL技术平台，可以生成具有细胞靶向性以及免疫耐受的慢病毒载体（包膜病毒），用以实现细胞靶向递送。

看他们的专利（EP 4 484 563 A1），他们的慢病毒主要分为以下部分：

膜锚定的纳米抗体用于靶向（主要包括VHH，scFv这类小蛋白），纳米抗体可溶性高，稳定性好，尺寸小。

此外，用于展示纳米抗体的scaffold也很重要，例如，使用PDGFR/CD8a铰链支架作为VHH与病毒包膜锚定域之间的连接子，可显著提升转导效率、细胞激活标记（如CD69、CD25、PD1）表达、细胞扩增及病毒功能滴度，这些优势优于IgG4连接子，可能源于其更好的物理灵活性，优化了VHH与靶标的结合及细胞间距离。

“别吃我”蛋白CD47用于减少非靶细胞的吞噬；敲除包装细胞的MHC-1分子，减少慢病毒表面携带的MHC-1，从而降低免疫原性，避免中和抗体反应。

病毒的包膜蛋白用于进入靶细胞。膜融合蛋白VSV-G的选择核心是通过突变改造，消除其广谱靶向性，同时保留膜融合功能，适配 VHH 介导的精准靶向，例如I331E 突变（能有效消除广谱靶向，适配 VHH 介导的 T 细胞、单核细胞等精准转导）。核心是可调控病毒载体包膜外VHH（靶向功能）与病毒包膜蛋白（辅助感染功能）的展示比例，结合 VHH 支架优化可提升转导效率。为实现此优势，优选方案为：VHH 与包膜蛋白需在病毒载体上分离展示、在生产细胞中分离表达，二者不融合或连接。

此外，特定合成启动子实现在靶细胞特异表达，降低非特异性（如 T 细胞特异性启动子 SYN19）。

Capstan

他们的网站十分酷炫，做得也很专业。

重点关注于LNP/mRNA/CAR-T三项技术的交汇融合，这三项技术的里程碑时间都做了标记和介绍，并且链接到了相关论文，做的很仔细，侧面体现了对技术本身的理解和对科学的致敬。

创始人和顾问团队星光熠熠，里面有CAR-T疗法的先驱Carl H. June 和mRNA疫苗诺奖得主Drew Weissman，都是“宾大系”的。

再来看CAPSTAN的专利（WO2025129201A1），主要包括人源化抗 CD8 抗体的设计与优化，靶向脂质纳米颗粒（tLNP）的构建与应用。

通过人源化改造，避免小鼠抗体引发的人体免疫反应，同时保留对人及食蟹猴 CD8α（CD8aa 同源二聚体、CD8αβ 异源二聚体）的交叉结合能力。

由 “脂质配方 + 靶向抗体 + 治疗 payload” 组成，脂质配方优选 CICL1（可电离阳离子脂质）、DSPC（磷脂）、胆固醇、DSG-PEG (2k)（非功能化 PEG - 脂质）、DSPE-PEG (2k)-MAL（功能化 PEG - 脂质，用于连接抗体），N/P 比（氮磷比）为 6，确保 payload（如 mRNA）高效封装。

将人源化抗 CD8 抗体（或其 F (ab') 片段）通过 “马来酰亚胺 - 巯基” 偶联到 tLNP 表面，通过抗体与 CD8+T 细胞表面 CD8α 的结合，实现 tLNP 向 CD8+T 细胞的精准递送。

payload 以 mRNA 为主，可编码 CAR（嵌合抗原受体）、TCR（T 细胞受体）或免疫细胞衔接器（如 BiTE），用于癌症（如多发性骨髓瘤、淋巴瘤）、自身免疫病（如肌炎）的治疗，支持体外改造 CAR-T 细胞或体内直接靶向递送。

这种非病毒递送系统，在临床前模型中已证实具有快速生物降解特性，因此具备重复给药的能力。瞬时表达的 RNA 有效载荷可在提升安全性的同时，仍能产生持久效果；可调节剂量，以根据疾病适应症达到理想的安全性和疗效标准；现成可用（不含细胞或病毒成分），这意味着患者无需经历 “静脉 - 静脉” 等待期；技术简化，省去了体外细胞疗法所需的复杂制造流程；无需患者接受严苛的淋巴清除预处理。

通过他们的免疫重置“immune reset”的理念,体内生成 CAR-T 细胞的方法不仅适用于自身免疫性疾病，在肿瘤学和纤维化领域也有潜在应用。此外，他们的 CellSeeker™平台可用于生成治疗产品，将基因编辑有效载荷在体内递送至造血干细胞，以治疗单基因血液疾病，这凸显了其广泛的治疗应用范围。

小结

总的来看，in vivo CAR-T 疗法里，慢病毒载体可实现基因长期稳定表达，包装容量较大，但存在随机整合致插入突变的风险，免疫原性虽低仍可能引发免疫反应，且靶向特异性要求高、技术难度大。tLNP 能通过抗 CD8 抗体精准递送 CAR mRNA 至 CD8+T 细胞，无基因组整合风险，易生产、成本低，对肝脏负担小且剂量可调，不过 CAR 表达瞬时，需多次给药，目前临床数据较少。最终哪种技术流派可以胜出，还需对临床试验结果进行评判。

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