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全血基因组DNA（gDNA）提取磁珠技术详解
磁珠法提取全血gDNA是一种高效、自动化的核酸纯化技术，通过表面功能化的磁性微球选择性吸附DNA，广泛应用于临床检测、基因测序和分子诊断。以下是系统解析：
全血基因组DNA（gDNA）
一、磁珠特性与DNA吸附机制
- 核壳结构与表面修饰
磁珠通常由氧化铁内核（提供磁性）和聚合物外壳（如聚苯乙烯或二氧化硅）构成，外壳表面修饰有羧基（-COOH）、氨基（-NH₂）或硅羟基（-SiOH）等官能团。这些官能团通过静电作用或共价键与DNA的磷酸骨架结合，实现特异性吸附。 - 缓冲体系的影响
- 高盐环境：裂解液中的盐离子（如Na⁺、K⁺）通过屏蔽DNA磷酸基团的负电荷，促进其与磁珠表面官能团的结合。
- 低盐洗脱：加入水或低盐缓冲液（如TE缓冲液）后，离子强度降低，DNA从磁珠上解吸，实现纯化。
3.磁珠粒径与分散性
- 粒径范围：通常为0.1-1 μm，粒径过小易团聚，过大则比表面积降低，影响吸附效率。
- 分散性：良好分散的磁珠能充分接触样本，提高DNA结合率。
三、工作原理
三步法纯化流程
1.裂解：
- 全血+裂解液（含GuHCl/SDS）→ 释放gDNA并变性蛋白
- 关键：加入RNA酶A（10 μg/mL）去除RNA干扰
2.结合- 加入磁珠，pH调至5.0–6.5（羧基磁珠最佳结合条件）→ DNA磷酸骨架与磁珠表面阳离子结合
3.洗脱 - 70%乙醇去盐→TE缓冲液（pH 8.0）洗脱，55°C加热5分钟提升得率
- 加入磁珠，pH调至5.0–6.5（羧基磁珠最佳结合条件）→ DNA磷酸骨架与磁珠表面阳离子结合
温馨提示：仅用于科研，不能用于人体！
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