星博学术——我国首个计算机辅助精子分析（CASA）专家共识发布

精液分析俗称精液常规检测，是评估男性生育力的重要手段。尽管2021年最新发布的《WHO人类精液检查与处理实验室手册（第六版）》中，精液分析仍推荐以手工检测为主，但计算机辅助精子分析（Computer-aided sperm analysis或Computer-assisted sperm analysis，CASA）因其高效、客观的特点，已成为国内许多临床实验室的主要检测手段。根据不完全统计，我国CASA的临床普及率约为73.6%-92.0%，远高于国际平均水平。

相较于手工检测，CASA能自动记录视频和图像，便于回放复核，因而检测速度更快、重复性更好，且可提供精子动力学参数，分析结果较客观。然而，诸多比对研究指出：CASA与WHO推荐的手工检测在精子浓度、活力等参数的检测结果上存在差异；此外，不同品牌型号的CASA系统检测结果之间的差异亦较大。因此，保证CASA系统检测结果的可靠性以及不同CASA系统检测结果之间的一致性，促进不同实验室之间的结果互认，仍是国内临床精液检查目前所面临的巨大挑战。

近期，由江苏省妇幼健康研究会生殖检验质控联盟牵头，组织全国28个省、自治区、直辖市的从事精液分析的近40位一线专家编制了我国首部聚焦于CASA的专家共识——《计算机辅助精子分析的实验室应用中国专家共识》，并在《中国男科学杂志》正式发布。共识中指出，该共识基于WHO第5版和第6版手册、ISO标准（ISO23162:2021）、精液分析领域的现有专家共识和近年来发表的国内外相关文献，并结合我国男科实验室现状反复修订最终形成，对CASA的规范化术语、设备选择、配套计数板的选择和应用、仪器性能验证、操作人员培训与考核、特殊样本的处理、质量控制等内容提出建议，同时提供CASA的标准化检测流程，为CASA的规范化及标准化应用提供参考，以期提高CASA的检测质量，为精液分析结果互认奠定基础。

要点解读

1、CASA的命名注意事项：精子分析而非精液分析。

目前CASA仅用于精子浓度、活力等参数检测，无法检测精液体积、pH，以及精液中各项生化标志物（精浆锌、果糖、酸性磷酸酶等），故本共识认为 “精子分析”的命名更贴合检测的本身含义。

2、推荐选择配置相差显微镜的视屏追踪法CASA体系来完成精子浓度、活力检测。

目前市面的CASA系统主要基于两种检测方法学（共识表1）：视频追踪法和光电比浊法。视频追踪法的检测原理与WHO推荐的手工检测原理基本一致，在此基础上相差显微镜利用光干涉原理能有效减轻杂质对图像采集系统的干扰，显著提升检测可靠性，因此予以推荐；而光电比浊法在精子活力、形态方面的检测可靠性不足，且检测所需样本量较大（通常≥0.5mL，导致部分精液量较低的患者样本可能无法满足检测要求），同时检测所需耗材为一次性耗材成本较高。

共识表1：CASA类型和特点

3、推荐在稳定的37°C恒温条件下完成精子活力检测。

精子运动能力受环境温度影响显著，因人体温度在37°C附近，故37°C恒温条件下检测的精子活力对临床正确评估精子生育能力更具有借鉴意义；而通常精液检测实验室的室温会维持在20-25°C，因此实验室如有条件，应尽量选择配备恒温系统的箱体式CASA（单纯配备恒温平台的露天式CASA可能会因周围环境温度差异影响计数池温度，最终影响检测结果）。

4、建议选择帧率＞60Hz的CASA系统完成精子活力检测，最低不得低于30Hz；如分析优化处理后的精子悬液，应使用＞85Hz的高帧率CASA。

因国内CASA主要是通过拍摄连续的样本图像来实现精液样本的分析，因此CASA帧率越高，意味着相同时间内采集的连续图像越多，对精子活力的分析可靠性越强。不同CASA厂商由于检测体系的硬件设施不同，拍摄帧率会存在较大差异。

5、不同的CASA样本计数板使用时具有不同的注意事项：毛细管虹吸式计数板结果易受SS（Serge-Silberberg）效应影响，有条件可尝试以补偿因子校正结果；滴样后盖压式计数板（如Makler计数板），应在充池后立即盖板以避免浓度假性升高。

WHO推荐的精子计数金标准是精液稀释固定后用改良Neubauer计数板进行人工计数。但Neubauer计数板因深度过高（100μm），受精子重叠或垂直运动影响，不利于CASA分析，故目前市面的CASA样本技数板以毛细管虹吸式计数板和滴样后盖压式计数板为主。有部分研究指出，滴样后盖压式计数板在充池后应立即盖板，否则随着盖板时间的延迟CASA的精子浓度检测结果会逐渐升高。导致该现象的机制目前尚不清晰，本共识的编制团队认为可能与CASA显微镜的热效应导致活动精子向分析视野聚集有关。

6、不同CASA品牌的样本计数板计数池深度存在差异，应使用与CASA检测设备匹配的计数板，并定期（建议每年至少1次）评估计数池深度。

目前国内CASA厂家众多，不同厂家的计数板计数池深度存在较大差异，常见的计数板计数池深度有10μm，12μm，16μm，20μm。另外，在使用过程中由于反复长期磨损，可能会导致计数池的深度逐渐偏离其标称值，故实验室应定期评估计数池深度，如计数池深度发生明显变化或计数板出现裂痕等损坏时，应及时更换计数板。评估计数池的深度主要有两种方法：激光间隙测量仪检测法（测量精度高，但须要专门仪器）；显微镜细准焦螺旋测量法（WHO第五版手册推荐方法，无须专门仪器）。

7、目前CASA在精子形态的检测方面仍存在不足，仍须由经验丰富的医技工作者根据WHO标准进行手工分析或校验CASA的精子形态分析结果。

目前在精子的形态学分析领域，CASA尚无统一的算法和正常形态的判断标准；且精子形态检测存在不同的染色方法，不同染色方法所需的CASA形态分析算法可能存在差异；此外，多数CASA系统无法有效分析精子尾部形态。虽然近年来市面出现了用于活精子、无须染色的CASA形态分析设备，但该体系的图像数据规模有限，且缺乏有效的质控措施，其可靠性仍有待大样本的进一步验证。

8、用于CASA分析的粘稠或不液化样本需预先处理。

本共识推荐此类样本的处理方法是：吸管反复吹打、加入1%的菠萝蛋白酶（终浓度75U/mL）或1%的糜蛋白酶（终浓度1000U/mL或0.1mg/mL）处理30min后检测，并将处理方法记录在报告单上。

9、样本的浓度过高或过低都会对CASA检测可靠性造成影响，且不同品牌型号的CASA检测体系的适宜样本浓度范围存在差异，须引起实验室的重视，当样本浓度超出CASA检测体系的适宜范围外进行相应的处理。

不同组织对CASA的最适推荐范围存在差异，WHO推荐的范围是（2-50）×106/mL;中国性学会生殖检验分会推荐的范围是（2-100）×106/mL。低浓度样本由于通常杂质含量较高，易引起CASA检测结果偏离样本真实值，对于此类样本应换用改良Neubauer计数板或大容量计数板进行人工计数；在CASA检测时样本浓度过高会对浓度、活力检测结果造成影响，对于此类样本可稀释后再进行CASA检测。

10、检测含有非精子成分的样本时，采用人工校正方式去除非精子成分后再进行CASA检测将有利于提高检测可靠性。

本共识指出，有研究报道对于含有圆形细胞、细胞碎片、结晶等非精子成分的样本时，采用人工校正的方式去除视野中的杂质，检测的可靠性将能获得显著提升，因此予以推荐该方法。

11、无头精子症样本在运用CASA分析时，应进行人工校正，并在备注中加以说明。

无头精子症通常表现为大头针状精子、无头的精子尾或无尾的精子头、头尾连接松散的精子。因目前市面多数CASA对精子尾部形态分析能力不足，因此CASA对无头精子症样本的检测可靠性较弱，故针对此类样本须人工校正后报告，或直接采用人工镜检。

12、应重视CASA的质量控制工作，做到每批次实验质控，按要求维护保养，并定期参加室间质评。

本共识推荐每月统计各报告参数的月均值，回顾分析技术因素、环境因素、受检人群等的影响。每季度对不同实验人员的分析结果进行比对。每年校准仪器设备，必要时修订标准操作程序。

13、本共识推荐了CASA使用应遵循的标准化流程（共识图1）。

即开机预热稳定->质控品分析->初步估计精子浓度以此决定是否使用精液原液还是稀释或改用改良Neubauer计数板计数->样本充分混匀后充池->待视野稳定后，随机选取≥6个视野且计数＞200条活动精子，并按95%置信区间评估差异可接受性->人工校正或复核（特殊样本须在报告中备注特定处理程序）。

《计算机辅助精子分析的实验室应用中国专家共识》原文：