大体积电转染技术突破！高效递送CRISPR敲除/敲入复杂载体

在细胞与基因治疗（CGT）快速发展的今天，如何在不依赖病毒载体的前提下，实现高效、可扩展的T细胞工程化，成为行业关注的焦点。Lonza近期推出的4D-Nucleofector® LV PRO模块，正是为应对这一挑战而设计的全新解决方案。

从小试到大规模：真正可复制的电转平台

LV PRO是Lonza经典Nucleofector®技术的最新进化版本，专为大体积、高细胞密度的转染需求而设计。该系统支持从0.5mL到20mL的多种体积处理，最大可处理10亿个T细胞，为从研发到GMP生产提供了真正可复制的电转平台。

其独特的电穿孔脉冲设计与模块化耗材系统，使得在小体积（如100μL）优化的转染方案，能够无缝迁移至大体积生产中，显著降低工艺开发成本与时间。

支持两种耗材模式

• 固定体积加样盒（FV）：适用于0.5–2.0mL，便于手动操作与工艺验证

• 流通式加样盒（FT）：支持高达20mL的连续处理，适配自动化与封闭式生产流程

数据验证：高效递送复杂构建体

在Lonza近期发布的技术海报中，LV PRO在多个关键指标上展现出卓越性能，尤其是在非病毒递送复杂构建体方面：

• 转染效率：在递送mRNA或质粒DNA时，LV PRO在2mL和20mL体积下的GFP表达效率与100μL参考组相当，且细胞活性在转染后24小时仍保持在>90%

• CRISPR敲除/敲入：在7位供体、13组实验中，LV PRO在TRAC敲除与RAB11A-GFP敲入中均表现出与小体积一致的效率与稳定性

• 一致性：20mL流通式加样盒在13个连续循环中，敲入效率与回收体积波动极小，验证了其工艺稳定性与无碎屑积累风险

这些数据不仅验证了LV PRO在实验室条件下的性能，更为其在临床级别的细胞制造流程中提供了坚实基础。

从电转到扩增：完整的细胞工程流程验证

电转只是细胞工程化流程的起点。LV PRO的优势在于其与下游扩增系统的高度兼容性。在G-Rex®生物反应器中，LV PRO转染后的T细胞可实现53–70倍扩增，最终获得超过4亿个活细胞，细胞活性在第7天仍保持在>85%，充分验证了其在实际生产流程中的可行性。

此外，LV PRO支持多种构建体（如3.5kb和1.4kb的HDR模板）与不同来源的T细胞（PBMC、CD3+，激活或静息状态），为工艺开发提供更大灵活性。

合规与转化：助力GMP级别制造

LV PRO不仅在技术层面实现突破，更在合规性与转化能力上提供全面支持。配套的RUO与GMP级耗材、符合21 CFR Part 11的LogWare软件，以及Lonza提供的IQ/OQ验证与技术支持服务，共同构建了一个从研发到临床生产的桥梁。

总结：LV PRO，不只是“放大”，更是“复制”

Lonza的LV PRO模块不仅解决了非病毒递送在大体积下的效率瓶颈，更通过一致性、灵活性与可扩展性，为CGT制造流程提供了真正可复制的解决方案。它不仅是电转技术的升级，更是细胞治疗制造流程中“可复制性”的关键保障。

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References:

1. H.Balke-Want et al., IOTECH, 2023,18, C,100375

2. Roth et al., Nature. 2018 Jul 11;559(7714):405-409