动物模型构建与评估︱长期精神紧张导致动物抑郁模型

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采用长期惊吓和睡眠剥夺使小鼠长期处于精神紧张状态，造模后进行抑郁行为学测试，探究长期精神紧张与抑郁症的关系，为开展有关抑郁症的发病机制及药物研发提供动物模型基础。长期精神紧张刺激模型表现出的行为绝望、活动能力下降、兴趣丧失和焦虑与抑郁症临床表现相似，且结合孤养模拟了抑郁症发病的常见因素。

模型建立

将17只雄性小鼠随机分为对照组7只、长期精神紧张刺激(LTMS)组10只。LTMS组单笼饲养。对照组7只一笼饲养，正常饲养，每周测定摄食量刺激实验之后进行行为学实验。对LTMS组小鼠采用每天随机时间进行猫惊吓3h、睡眠剥夺12h两种刺激，连续21d。睡眠剥夺箱使用60cm×40cm×30cm水箱，水面深度足够淹没小鼠，在中央放置直径30mm圆台并高出水面0.5cm，在水箱上方放置有鼠粮的铁网，以确保小鼠的食物供给。猫吓操作在直径1.2米的旷场中，将装有单只小鼠的铁笼放在中央，吸引猫对小鼠惊吓，为确保猫在长期实验中的兴趣，实验前禁食并不定期给予活鼠奖励。

行为学评价

摄食量测定：

分别于刺激的第0天、第7天、第14天、第21天早上8：00给小鼠添加食物50g，次日早上8：00称取每只小鼠的食物残余量，计算其24h摄食量。同时对小鼠称质量，以24h内消耗食物量(mg)/体质量(g)作为食物消耗量。同笼的小鼠要分开孤笼测量。

旷场实验：

用旷场实验(open field test，OFT)检测小鼠活动度和对陌生环境探索的行为程度，水平和垂直运动的次数是旷场实验主要观察指标。刺激造模21d之后在安静、适宜小鼠的环境中，将小鼠放置于旷场敞箱(50cm×50cm×30cm)底面中心，箱壁四周及底面为白色。底面划分为9个等边方格。旷场观察实验时间为5min。将小鼠放入中心方格内，摄像记录5min内穿越格数(以重心越过为准)，记录小鼠在旷场中的运动路程、穿越格数(水平活动得分)和前肢均离地或攀壁的直立次数(垂直活动得分)。每次实验后用75%酒精对旷场装置进行清理，消除异味。小动物运动轨迹跟踪系统，旷场行为测试箱，自制(长×宽×高为50cm×50cm×30cm)。睡眠剥夺箱，自制(长×宽×高为60cm×40cm×30cm)，中央固定一直径30mm平台。

高架十字迷宫实验：

高架十字迷宫由开放臂(30cm×5cm)、闭合臂(30cm×5cm×15cm)和两臂汇合的中央区(5cm×5cm)组成，距地面50cm。根据实验，于模型刺激21d测试，将小鼠放在中央区，面对开臂方向，观察动物在开臂和闭臂中的活动情况，实验在暗光、安静下进行，观察5min，记录小鼠进入开放臂次数、开放臂停留时间、进入闭合臂次数和闭合臂停留时间。

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强迫游泳实验：

强迫游泳实验主要记录小鼠在水中放弃挣扎不动的时间，可以较好反映其低落情绪和绝望状态。参考Porsolt等的操作方法并根据具体条件稍作修改，于模型刺激21d测试，实验前为减少小鼠紧张感，提前1h将小鼠移至安静的实验室。实验时将小鼠置于直径15cm的上方开口的透明圆柱形容器之中，水深15cm，水温(23±2)℃，持续6min，全程通过摄像机记录，统计后5min内小鼠不动的总时间。每只小鼠实验后换水并清洗侧壁以防止残留气味影响实验。小鼠在水中确保头部浮起并停止挣扎或偶尔滑动并保持漂浮判断为不动状态。

本实验造模前期，小鼠易激惹、焦躁，反抗性强，造模后期精神萎靡，被毛杂乱无光泽，反应迟钝。对比对照组，LTMS组小鼠应激前摄食量差异无显著性，在第7天摄食量增加，除了与小鼠处于快速生长期有关，前期的精神紧张刺激可能加剧了小鼠摄食量，LTMS组小鼠在第14天之后摄食量减少，在第21天摄食量明显减少并有显著性差异。同时小鼠体质量增长也缓慢，提示长期的猫吓和睡眠剥夺影响了小鼠进食欲望，并导致其生长迟缓。第28天时，模型组小鼠被毛暗淡，活动性差且外物刺激时反应迟钝。造模期间3只小鼠死于刺激，死亡率为30%。

强迫游泳实验中将小鼠放在盛水的圆柱容器内，最初在水中表现出剧烈挣扎并试图逃脱，但当发现无法逃脱时便停止挣扎，头部露出水面保持一种在水中漂浮不动的状态，此状态称为“行为绝望”。本实验中，LTMS组小鼠不动时间显著性延长，表现出了行为绝望状态。旷场试验中，小鼠穿越水平格数和站立次数可以反映活动度和探究行为。LTMS组小鼠穿越格子数(水平运动)和直立次数(垂直运动)较对照组明显减少，反映了小鼠的活动度降低和对新鲜环境的探索欲望降低。高架十字迷宫实验中，小鼠在与外界环境相通的开臂中会有一定的新奇性和探索欲望，小鼠由于嗜暗性会倾向于在闭臂中活动，但出于好奇心和探究性又会在开臂中活动。焦虑抑郁水平高的小鼠会退缩到闭臂中，反之对开臂的探究次数则增多。LTMS组小鼠进入开臂的次数比例显著下降，且在闭臂时间显著增加，提示产生焦虑行为。

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