品名:ATTO 647N TCO 与 ATTO 647N 马来酰亚胺的对比分析
用途:科研
概述:
ATTO 647N 是一款高性能的近红外荧光染料,以其优良的光稳定性、强烈的荧光信号以及较低的背景干扰,在激光共聚焦显微镜、单分子成像、STED 超分辨成像和流式细胞术中被广泛应用。为适应不同的生物偶联策略,ATTO 647N 被开发成多种功能化形式,其中 TCO(反式环辛烯) 和 马来酰亚胺(maleimide) 是两种用途差异显著的关键衍生物。
1. 化学结构与反应机制
ATTO 647N TCO 是将TCO(trans-cyclooctene)基团引入染料分子,使其可参与生物正交的四嗪-环辛烯点击反应(IedDA,逆电子需求Diels-Alder反应)。该反应无需催化剂,在温和条件下即可实现超快速、较高专一性的偶联,是当前*热门的活细胞点击标记技术之一。
ATTO 647N maleimide 则是在染料结构中引入马来酰亚胺活性基团,专一地与巯基(如半胱氨酸残基)发生Michael加成反应,生成稳定的硫醚键。该反应在中性或略酸性缓冲液中反应迅速,常用于蛋白质、抗体或酶的选择性标记。
2. 偶联目标与选择性差异
ATTO 647N TCO 适用于与四嗪(Tetrazine)修饰的分子发生点击反应,尤其适合构建生物正交探针、活体成像探针及可控释放系统。该体系对其他生物大分子无反应干扰,是“先标记,后染色”策略的理想选择。
ATTO 647N maleimide 专用于与含游离巯基的蛋白质、抗体或其他小分子反应,具有一定的选择性,但在含多种活性官能团的体系中可能受到干扰,因此要求反应条件严格控制在pH 6.5–7.5之间。
3. 应用领域与适用场景
ATTO 647N TCO 主要应用于需要高选择性、快速反应且无催化剂环境的场景,如活细胞点击标记、体内可控探针标记、信号放大体系、细胞膜或代谢标记研究,常与ATTO 647N Tetrazine配套使用。
ATTO 647N maleimide 常用于免疫标记、酶标记、蛋白探针构建、荧光适配体和小分子标记等传统偶联体系,尤其适合对位点特异性要求较高的蛋白质标记。
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同系列:
ATTO 514 Tetrazine
ATTO 514 maleimide
ATTO 565 NHS ester
ATTO 565 TCO
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