国自然研究方案中的关键技术总结

来源：青椒医学

巧妇难为无米之炊。工欲善其事必先利其器。

研究方案中「关键实验技术（手段）」的系统性学习和理解，将极大提升你对研究方案的把控能力和设计能力，运筹帷幄，决胜千里，以不变应万变。

例如你知道 WB 的实验目的是什么吗？难道只是检测表达水平？那么 WB 能定量计算蛋白丰度吗？如果能那为何又有 ELISA 这种技术？

技术之间有互补性

技术之间，是相互互补的，又不可替代，这需要进一步地理解和学习。理解关键实验技术（手段）的原理特点和实验目的，和可能的实验结论，有助于研究方案的创新和优化。

给大家进行了总结，有不足之处请在留言区留言，协助我们更正：

1. 检测 RNA 分子在组织和细胞空间分布和表达丰度的技术：活细胞动态 RNA 成像技术、单分子 RNA FISH 原位杂交、多分子 RNA Scope 原位杂交技术、细胞核-细胞质分离结合 qPCR、单细胞测序技术、空间转录组技术、Northern blot、dot blot 等等；

2. 检测蛋白分子的空间分布和表达丰度的技术：免疫荧光、免疫组化、细胞核-细胞质分离结合 WB、GFP 标签融合蛋白示踪技术、空间蛋白质组学等等；

3. 检测 DNA 拷贝数、突变与否的技术：FISH 原位杂交、qPCR、基因组测序等等。

4. 检测某蛋白分子总的表达量（不含空间信息）：ELISA 技术（定量）、western blot 技术（半定量，不准确）；

5. 检测某蛋白分子的分子量大小（不含空间信息）：分子筛层析法、western blot 技术、双向 2D 电泳、质谱分析等等；

6. 检测某蛋白分子的高级结构信息：蛋白结晶后冷冻电镜解析高级结构、分子对接分析等等；

7. 分子表达干预技术：分子克隆操纵表达技术、病毒载体过表达或者敲减表达（shRNA、siRNA）、点突变技术、CRISPR 敲除或者敲入技术、CRISPRi 沉默技术、功能区分段（truncate）敲除技术、靶蛋白小分子抑制剂或者单抗抑制剂等等；

8. 体内水平探索分子功能：类器官、PDX 模型、裸鼠皮下成瘤、各种 XXX 疾病动物模型、活体成像技术等；

9. 细胞功能探索：细胞增殖、细胞周期检测、细胞衰老、细胞干性、细胞分化、细胞凋亡、细胞焦亡、炎症风暴、迁移、侵袭能力，表面受体表达等等；亚细胞结构的囊泡和细胞器的分离和电镜影像学观察；

10. 分子间互作实验方法：RNA、DNA、蛋白之间的互作分析技术如下图；

11. 新疾病分子、通路的寻找：蛋白质组学、代谢组学、全转录组测序、生物信息学分析等等；

关键技术上，也要量力而为，一定要符合本单位的硬件技术设施定位，且不可为了新而新，写一些天马行空，脱离实际的技术手段上去，评审专家也会提出质疑。

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