斑马鱼行为篇（67）：斑马鱼成瘾行为检测

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斑马鱼条件性位置偏爱（Conditioned Place Preference, CPP）实验是一种用于研究动物学习与记忆、药物成瘾性以及评估药物奖赏效应的行为学实验方法。斑马鱼CPP模型已经在研究药物成瘾性、药物奖赏效应以及神经递质系统方面显示出其有效性，并且由于其高通量和易于操作的特点，已成为药物筛选和神经科学研究的重要工具。

AB系斑马鱼按照标准流程饲养于培养系统，温度27~29℃；PH7.2~7.6；昼夜光照控制14h光照（8:30am~10:30pm）和10h黑夜。

斑马鱼条件性位置偏爱实验：

基线偏好测定：首先，将斑马鱼放入一个分为两个或三个区域的实验箱中，这些区域具有不同的视觉和触觉特征，以确定鱼对各个区域的初始偏好。

条件化阶段：在基线偏好测定之后，将斑马鱼限制在它们最不喜欢的一侧，并暴露于测试药物。这一阶段，药物与特定环境刺激配对，形成条件化关联。

测试阶段：条件化阶段之后，进行探测测试以确定偏好是否发生变化。这通常是在没有药物影响的情况下进行的，以测量鱼在各个区域花费的时间。通过比较条件化前后的偏好变化，评估药物的奖赏效应。如果在药物配对的环境中花费的时间增加，则被视为药物具有积极的增强特性。实验装置通常包括分隔的水箱，可以是两个或三个隔间，配备有追踪软件以记录鱼的运动和偏好。在实验过程中，需要控制环境因素，如噪音、温度和喂食时间，以避免对实验结果的影响。药物可以通过腹腔注射或直接溶解在水槽的水中给予。使用自动化跟踪系统，如FishTrack软件（上海欣软），来分析鱼的行为，包括在不同环境中花费的时间和行进的距离。

选取雄性斑马鱼，6月龄，400~600mg，随机分为对照组和给药组，在第1、3、5、7日，将斑马鱼腹腔注射药物，然后将斑马鱼置于CPP鱼缸明区训练40min，在第2、4、6日时注射等量的生理盐水并置于暗区训练40min。第8日，让斑马鱼自由运动，拍摄动物运动20min，分析动物的运动轨迹。

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注意事项：

确保实验环境稳定，光照、温度、湿度等条件应保持一致，避免外部因素对实验结果的干扰。实验操作步骤需统一规范，包括药物的给予方式、剂量、时间等，确保每次实验的一致性。在实验前准确测定鱼的基线偏好，排除对实验结果的潜在影响。在建立模型时，注意排除那些表现出异常行为或基线偏好大于70%的鱼，以确保实验结果的准确性。使用自动化行为跟踪和分析软件，如FishTrack，以减少人为误差并提高数据分析的准确性。确保使用的斑马鱼健康、无疾病，来自标准化的养殖环境，避免由于动物个体差异对实验结果造成影响。进行足够次数的重复实验，以确保结果的可靠性和统计学意义。合理设置对照组，包括药物对照和空白对照，以评估实验操作和药物处理的效果。确保实验过程中避免任何形式的选择偏差或操作者偏差。在得到初步实验结果后，进行验证性实验来确认结果的可重复性。

CPP实验是研究药物成瘾的经典模型。正常情况下，斑马鱼习惯停留在黑暗处，对暗区产生偏爱，如果药物刺激具有依赖性，就会改变动物的习性。若给药组的斑马鱼在明区的活动时间显著超过了训练前，提示斑马鱼对要问产生了依赖，说明即成瘾模型建立成功。

参考文献：

• Zhu C, Chen Z J C, Zhou Y T, et al. Antibiotic-driven gut microbiome disorder alters the effects of sinomenine on morphine-dependent zebrafish[J]. Front Microbiol. 2020, 11: 946

• Mathur P, Lau B, Guo S. Conditioned place preference behavior in zebrafish. Nat Protoc. 2011 Mar;6(3):338-45.

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