国自然标书技术路线图的 4 种绘制逻辑

国自然申报系列讲座（7）

本期主题：技术路线图绘制及常用软件

本期讲师：青椒医学-徐老师

参与多项国自然面上、青年、地区以及省自然项目标书的撰写，目前国自然成功数量 17 个。有丰富的医学知识背景（有医师资格证）以及科研实验经历，熟悉多项疾病的发病机制，擅长将科研思路与临床问题相结合。

课程要点

1.技术路线图的要求和建议

2.技术路线图的画法以及绘制软件

3.拆解中标题目的技术路线图

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国自然级别的技术路线图，要根据研究方案的 3-4 个模块，分成 3-4 张子图，一一对应。而每张技术路线图的画法，也有不同类型的区别，主要分为以下四种（其中，第三种更加推荐）：

一、以关键技术方法为主线的技术路线图

推荐指数：★★☆☆☆

以实验方法为主线的合理之处在于每种技术所实现的实验目的不同，而且理解了每种技术的原理特点，你会发现实验方法的组合和选择很容易达到。

1. 检测蛋白分子的空间分布和表达丰度的技术：免疫荧光、免疫组化、细胞核-细胞质分离结合 WB、GFP 标签融合蛋白示踪技术、空间蛋白质组学等等；

2. 检测某蛋白分子总的表达量（不含空间信息）：ELISA 技术（定量）、western blot 技术（半定量，不准确）；

（分子研究方向）

3. 检测某蛋白分子的分子量大小（不含空间信息）：分子筛层析法、western blot 技术、双向 2D 电泳、质谱分析等等；

4. 检测某蛋白分子的高级结构信息：蛋白结晶后冷冻电镜解析高级结构、分子对接分析等等；

5. 检测 DNA 拷贝数、突变与否的技术：FISH 原位杂交、qPCR、基因组测序等等；

6. 检测 RNA 分子在组织和细胞空间分布和表达丰度的技术：活细胞动态 RNA 成像技术、单分子 RNA FISH 原位杂交、多分子 RNA Scope 原位杂交技术、细胞核-细胞质分离结合 qPCR、单细胞测序技术、空间转录组技术、Northern blot、dot blot 等等；

7. 分子表达干预技术：分子克隆操纵表达技术、病毒载体过表达或者敲减表达（shRNA、siRNA）、点突变技术、CRISPR 敲除或者敲入技术、CRISPRi 沉默技术、功能区分段（truncate）敲除技术、靶蛋白小分子抑制剂或者单抗抑制剂等等；

8. 体内水平探索分子功能：类器官、PDX 模型、裸鼠皮下成瘤、各种 XXX 疾病动物模型、基因编辑动物、活体成像技术等；

9. 细胞功能探索：细胞增殖、细胞周期检测、细胞衰老、细胞干性、细胞分化、细胞凋亡、细胞焦亡、炎症风暴、迁移、侵袭能力，表面受体表达等等；亚细胞结构的囊泡和细胞器的分离和电镜影像学观察；

10. 分子间互作实验方法：RNA、DNA、蛋白之间的互作分析技术如下图；

11. 新疾病分子、通路的寻找：蛋白质组学、代谢组学、全转录组测序、生物信息学分析等等。

二、以科学问题为主线的技术路线图

推荐指数：★★★★☆

以解决 10-20 个小科学问题为目的的分类方法。优点是把 3-4 个「拟解决的关键科学问题」，解构成 10-20 个小科学问题来逐一解决。但相互之间又形成功能单元模块，共同指向并组成同一个「关键的科学问题」。

三、以研究目标为主线，递进式展开的技术路线图

推荐指数：★★★★★★★★★

四、以年度研究时间轴为主线的技术路线图

推荐指数：★★★☆☆

优点：能让专家清楚地知道整个研究计划的时间线，评估是否有能力按照规定时间完成实验内容。

缺点：可能主次不太分明，研究层次被弱化了。

青椒哥还是比较推荐：以研究目标为主线，递进式展开的技术路线图。

另外值得注意的是，技术路线图中一定要包含有以下辅助信息：

· 实验分组的详情；

· 研究材料来源和名称；

· 已完成部分和未完成部分的标注（用颜色色块区分）；

· 关键实验手段的研究对象。

国自然申报系列讲座第七场

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