北京
威斯康星大学麦迪逊分校兽医学院病理生物学系的Manuel V. Borcaa等人在Journal of Virology上所发表的题为Deletion of the H108R Gene Reduces Virulence of the PandemicEurasia Strain of African Swine Fever Virus with Surviving Animals Being Protected against Virulent Challenge的文章，该文主要介绍了高毒力非洲猪瘟病毒（ASFV）Georgia2007 株中 H108R 基因缺失后对其毒力的影响。H108R在毒力中的重要作用与痘病毒中存在的其他小跨膜蛋白(如I5L)一致，其功能与增强病毒复制和毒力有关。
为了更深入地了解H108R基因，作者进行了全面的分析。首先对非洲猪瘟H108R基因的遗传多样性进行生物信息学分析。发现编码氨基酸22、23、28、41和45的密码子位于该蛋白的高度保守区域，表明这些位点与H108R蛋白功能的潜在相关性。
H108R基因编码蛋白的功能尚不清楚。为研究H108R基因在猪巨噬细胞中病毒复制及对ASFV毒力的影响，制备了一种缺失H108R基因的重组病毒(ASFV-G-ΔH108R，缺失86个核苷酸，并插入1226个核苷酸)。ASFV-G-ΔH108R是用高毒力的ASFV株，Georgia 2007 (ASFV-G)作为亲本病毒产生的，在同源重组过程中删除H108R基因，在ASFV p72启动子下，用含有荧光报告基因mCherry的盒子代替H108R基因(图3)。根据荧光活性，经过16个限制性稀释纯化步骤后，获得纯化的重组ASFV-G-ΔH108R。
采用体外培养的猪原代巨噬细胞感染ASFV-G-ΔH108R，来评价H108R基因缺失对病毒复制的影响。通过生长曲线来评估ASFV-G-ΔH108R与亲本ASFV-G的复制动力学(图4)。感染猪巨噬细胞时，MOI为0.01，并在感染后2、24、48、72和96h采集样本(hpi)。结果表明，虽然在最终取样时间ASFV-G-ΔH108R的病毒产量相似，但与亲本ASFV-G相比，在24、48和72 hpi时，其生长动力学显著降低(10~100倍)。因此，H108R基因不是病毒复制所必需的，但它的缺失略微延迟了ASFV-G在原代猪巨噬细胞培养物中的复制能力。
通常，在ASFV感染中存活下来的猪对强毒同源病毒的攻击会产生保护性免疫。为了评估ASFV-G-ΔH108R感染动物抵御高毒力亲本病毒ASFV-G攻击的能力，在28天后用102HAD50亲本病毒攻击4只ASFV-G-ΔH108R感染的幸存猪。另设一组(n=4)幼年动物作为对照组，在相同条件下进行实验。对照组动物在约第3至第5天出现了ASF的临床症状，随后疾病严重程度迅速增加，所有动物在第3至第7天之间被安乐死(图7)。相反，感染ASFV-G-ΔH108R组的动物在21天的观察期内保持临床正常，甚至没有出现短暂的体温升高。因此，感染ASFV-G-ΔH108R可诱导动物在受到高毒力亲本病毒攻击后产生保护作用。正如预期的那样，感染ASFV-G的对照组动物在第4天的病毒滴度很高(范围在107.3至108.3 HAD50/mL之间)，直到动物被安乐死之前，病毒滴度一直很高(图6)。总的来说，感染ASFV-G-ΔH108R的动物在感染ASFV-G-ΔH108R后，病毒滴度逐渐下降，直到实验结束(攻毒后21天)。
综上，确定非洲猪瘟病毒毒力的决定因素至关重要，特别是如果该基因可用于开发实验性疫苗。从ASFV-G基因组中删除H108R基因，明显降低了病毒的毒力，所有在ASFV-G-ΔH108R感染中存活的动物在28 dpi时都能抵抗亲本ASFV-G的攻击，并且没有出现任何与疾病相关的临床症状(甚至没有短暂的体温升高)，这说明了在这些动物中产生的保护作用。需要强调的是，ASFV-G-ΔH108R的低剂量(102HAD50)可诱导保护性免疫反应，以对抗毒力强的亲本病毒的攻击。
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本期编辑：Hantavirus
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