乙肝表面抗原假阳性？

作者 | 何祯硕

单位 | 衡水市第六人民医院

前 言

乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）简称乙肝病毒，是一种DNA病毒，基因结构为一种环状双链DNA，属于嗜肝DNA病毒科，具有完整的负链和不完整的正链，在负链DNA核苷酸序列为模板转录的RNA上含有四个开放阅读框（ORF），分别为S、C、P、X，这些区域分别产生有功能的不同病毒蛋白，例如核心抗原以及相关抗原（如E抗原等）产生于C区；三种表面抗原（L-HBs, M-HBs, and S-HBs）产生于S区；HBV X蛋白产生于X区域等[1]。该病毒主要经血液、母婴以及性接触传播。

乙肝五项，又叫“乙肝两对半”，主要包括乙肝表面抗原（HBsAg）、乙肝表面抗体（HBsABb）、E抗原（HBeAg）、E抗体（HBeAb）以及核心抗体（HBcAb），作为术前患者必查的项目，其检测仪器以及试剂的特异性与敏感性必须做到绝对可靠。

尤其当乙肝表面抗原（HBsAg）、E抗原（HBeAg）等出现阳性的时候，一定要用另外一种或两种方法复核，确保结果的准确性。任何差错都可能会造成临床手术过程中感染的发生。本次对一特殊患者的乙肝五项检测过程进行详述。

案例经过

患者：男，66岁

主诉：发热、咽痛来我院就诊。

病史简要：老年男性，急性病程。患者于一天前无明显诱因出现发热，最高体温达39.5℃，伴咽痛、头痛，稍咳嗽、腹胀，当地未治疗，为明确诊治而来院，急诊行心电图示窦性心动过速，п、ш、aVF、V3-6 ST-T改变。因口服中药，近一个月腹泻1-2次。既往“心肌缺血”病史1个月余，阵发性右上胸痛，向后背放射，于某院口服中药治疗，症状无改善。发现“肝炎”病史50年，具体不祥，曾药物治疗，后未处理。

实验室检查:乙肝五项、丙肝。

检查结果如图所示

图1 患者乙肝五项+丙肝检测LIS结果

结果为表面抗原阳性，其他检测结果均为阴性，之后，检查今天的质控结果均在控。胶体金法对结果进行复核，结果如图所示。

图2 患者胶体金复核结果

两种胶体金法检测结果均为阴性，与仪器发光结果完全相反。于是再次上机做复检，发光结果如图所示。

图3 发光法复查患者表面抗原结果

“红线框”内为两次发光法所做的结果，均为阳性。胶体金法为阴性，初步考虑怀疑是否为“勾状效应”。所谓“勾状效应”是指抗原抗体发生反应的过程中，出现抗原过量而使结果出现假阴性的现象。于是我们将标本进行了一个十倍稀释，再次观测胶体金结果，结果如图所示，仍为阴性。

图4 患者标本血清稀释十倍后胶体金表面抗原结果

及时联系临床进行沟通，说明情况，于第二天重新抽血上机检测。发光结果如图所示。

图5 患者重新抽血复查乙肝表面抗原发光结果

虽然数值有所下降，但是表面抗原仍然为强阳性，由于我们当时没有手工ELISA方法进行复核，于是我们将标本送到了上级医院进行复检，复检结果显示为阴性，如图所示。

图6 上级医院复检患者结果

目前为止，说明该患者的结果明显是假阳性，该患者并无乙型肝炎病毒感染，那么是什么原因造成的这种假阳性呢？

案例分析

该患者乙肝表面抗原出现假阳性，我们将从患者自身情况以及检测方法进行分析。首先，该患者是因为发热、咽痛、稍咳嗽、腹胀来我院就诊，并有心肌缺血以及服用中药使（详见图7首诊记录）。

图7 患者首诊记录

有相关文献报道，一些情况可能会影响化学发光法的检测结果，例如注射流感或狂犬病疫苗[2,3]，相关免疫抑制剂的应用[4,5]，移植抗原、自身抗体的存在[6,7]；也有报道称，乙肝疫苗接种也可导致接种者出现可检测的但短暂的抗原血清[8]。

从该患者的病例资料我们可以看出，患者有发热、咽痛等症状为流感相关症状，可能是引起表面抗原假阳性原因之一；其次，从病例资料中我们了解到该患者有肝炎病史，而乙肝五项与丙型肝炎均为阴性，故怀疑其有自身免疫性肝病病史，自身抗体的存在可能是导致患者乙肝表面抗原检测假阳性的另外一原因。

从仪器的检测方法考虑，本院乙肝表面抗原检测方法为化学发光法，原理为：由纯化的多克隆乙型肝炎病毒表面抗体包被的发光微粒、生物素标记的单克隆乙型肝炎病毒表面抗体，辅以乙型肝炎病毒表面抗原，在均相条件下，采用双抗体夹心法定性或定量检测人血清或样品中的乙型肝炎病毒表面抗原。

从方法学上我们可以看出，包被物质为纯化的多克隆抗体，而非单克隆抗体。多克隆抗体可与多种抗原表位进行结合，其特异性会受到一定影响，易产生假阳性。为了验证该患者血清中是否有干扰物质存在，我们将标本送回仪器公司本部进行系统验证，仪器公司先进行了一个标本血清结果的对比实验，本公司仪器测试确实为假阳性（结果如图8）。

图8 公司内部验证比对结果

接下来对样本进行了一个不同浓度的稀释过程，结果显示在稀释10倍时结果变为阴性，与样本的检测数值并非线性关系，由此推断确实有干扰物质的存在，至于是何种物质干扰，由于条件所限未能检测出其成分（如图9）。

图9 公司品牌仪器不同浓度稀释结果

总 结

乙肝五项作为术前患者的必查项目，其检测仪器与试剂要求必须有足够的敏感性以及特异性，任何假阳性都会造成医疗事故的发生。根据相关报道显示，目前我国有超过9千万人为乙肝病毒携带者，这使得肝硬化、肝癌等疾病急剧增加[9]。因此特异性的检测方法，对患者进行准确诊断是我们检验工作者的首要任务。表面抗原的检测方法见表1。

表1 乙肝病毒检测方法

由于不同品牌的发光检测仪器以及检测方法都存在一定的局限性，这就要求我们在做日常检测的过程中，对检测结果异常的标本要做到严格复核，充分发挥我们检验工作者的特长，找出问题所在，为临床提供一份值得信任的检测结果。

专家点评

张晓胜，衡水市第六人民医院检验科主任，副主任技师

乙肝表面抗原起初在1965年由费城遗传学家Brumberg发现，在68年认识到该抗原与肝炎相关，被称为肝炎相关抗原，也就是现在的表面抗原（HBsAg）。1970年Dane报道了完整的HBV颗粒。乙肝病毒的主要传播者为急性、慢性乙肝患者以及病毒携带者。其传播方式主要包括水平传播、垂直传播以及医源性（输血、血透等）传播。表面抗原在感染后2-6个月出现。急性自限性肝炎6个月内该抗原可消失，而慢性肝炎或慢性HBsAg携带者可持续阳性。

表面抗原有抗原性而无传染性。表面抗体（HBsAb）为保护性抗体，在体内可持续数年，其出现标志着HBV感染进入恢复期。E抗原（HBeAg）是核心抗原的降解产物，病毒在肝细胞内首先合成其前体，经切割加工后形成E抗原，因此它只存在于乙肝病毒感染者的血清中。E抗体随着E抗原的消失而出现，标志着病毒复制减少、传染性减低。核心抗原（HBcAg）主要存在于病毒感染的肝细胞内，到血液中即降解为E抗原，所以在血清当中我们无法检测核心抗原的浓度，只能检测核心抗体。本次检测所出现的假阳性告诉我们，不同品牌的发光仪器检测特异性有一定局限性，这就要求我们在做检测的过程中要对结果仔细审核，遇到异常结果要用两种方法进行对比复核，保证结果的可靠性。

参考文献

[1]Tsukuda S, Watashi K. Hepatitis B virus biology and life cycle[J]. Antiviral Res, 2020, 182: 104925.

[2]Buffington J, Shapiro C N, Holman R C, et al. Multiple unconfirmed-reactive screening tests for viral antibodies among blood donors[J]. Transfusion, 1994, 34(5): 371-5.

[3]Plotkin S A, Loupi E, Blondeau C. False-positive human immunodeficiency virus screening test related to rabies vaccination[J]. Arch Pathol Lab Med, 1995, 119(8): 679.

[4]Bar-Shany S, Green M S, Shinar E. False positive tests for anti-hepatitis C antibodies and the problem of notifying blood donors[J]. Int J Epidemiol, 1996, 25(3): 674-8.

[5]Schüpbach J, Baumgartner A, Tomasik Z. HTLV-1 in Switzerland: low prevalence of specific antibodies in HIV risk groups, high prevalence of cross-reactive antibodies in normal blood donors[J]. Int J Cancer, 1988, 42(6): 857-62.

[6]Vardinon N, Yust I, Katz O, et al. Anti-HIV indeterminate western blot in dialysis patients: a long-term follow-up[J]. Am J Kidney Dis, 1999, 34(1): 146-9.

[7]Willman J H, Martins T B, Jaskowski T D, et al. Heterophile antibodies to bovine and caprine proteins causing false-positive human immunodeficiency virus type 1 and other enzyme-linked immunosorbent assay results[J]. Clin Diagn Lab Immunol, 1999, 6(4): 615-6.

[8]Dow B C, Yates P, Galea G, et al. Hepatitis B vaccinees may be mistaken for confirmed hepatitis B surface antigen-positive blood donors[J]. Vox Sang, 2002, 82(1): 15-7.

[9]Wang P G, Zhang X S, An J, et al. [Analysis of serum epidemiological characteristics of hepatitis B among the population of 1-59 year-old in Gansu Province][J]. Zhonghua Yu Fang Yi Xue Za Zhi, 2018, 52(10): 1056-1058.

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编辑：徐少卿 审校：陈雪礼