浙江
家人们谁懂啊！？最近和 RNA 杠上了……
提了两个礼拜了，结果一直不理想，总是有各种问题。昨天用提取产物跑胶，师兄瞅了一眼，还以为我是在做 PCR！今天又做了一次，以为质量超好，其实是有 DNA 残留给我带来的错觉...
RNA 这东西真的太让人心烦了，不稳定又不配合，每次提取都在不断下战书：RNA 降解、低产率、低纯度、DNA 污染，相信提取过 RNA 的你也一定遇到过。
为了让大家能够不再白白受苦，今天我们将为给大家分享下 RNA 分离技巧，特别是最大限度地回收高质量、无 DNA 的 RNA 的实践经验。另外，我们也为大家准备了 TR205 小量总RNA 提取试剂盒试用福利，助大家的提取事半功倍！
TR205 小量总 RNA 提取试剂盒免费试用
无需进行相分离/无需使用氯仿/无需沉淀过程
整个提取过程仅需 10 分钟！
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RNA 提取通关指南
RNA 提取试剂盒使用说明：
本方法无需传统 TRIZOL 提取方法的相分离，而且不需要使用任何有毒有害的试剂（例如氯仿），无需沉淀过程，7 分钟就可完成整个操作步骤，并且可以提取到含 microRNA 的总 RNA。
如何防止 RNA 降解：
RNA 极易降解，非常不稳定。RNase 仿佛无处不在，只要稍不注意，样品中的 RNA 就会被快速降解。为了避免 RNase 的影响，需要中收集样本时，就做好必要的措施。常用的样品稳定方法包括液氮快速冷冻、干冰乙醇浴或 -80 °C 冷冻室。然而，这些方法也有缺点，比如核酸中冻融过程中可能会损伤。推荐通过以下两种方式进行样本的处理：
1
使用裂解缓冲液：将样品溶解中裂解缓冲液中，使 RNase 失活 (如 TRIzol、RNA 裂解缓冲液等)，处理后再将样品处理或冷冻保存；
2
使用稳定试剂：将样品浸泡在稳定试剂中（如 DNA/RNA Shield），使核酸酶失活，并在环境温度下长时间保护核酸。适用于实地收集样本或处理珍贵的病人样本（例如组织活检、全血等）。
如何确保样品完全溶解？
在 RNA 提取过程中，提高 RNA 产量和质量的最佳方法是保证样品完全裂解。然而，不用的样本需要针对性的设置裂解方案。例如，血细胞（如淋巴细胞、PBMCs 等）和微生物细胞往往很难有效溶解，仅仅添加基于洗涤剂的裂解缓冲液可能并不够。为了提高裂解效果，可以将裂解缓冲液与机械裂解步骤（研磨珠破碎）匹配，或者在裂解液上游加入酶裂解步骤（如蛋白酶 K、溶菌酶等）（图 1）。
图 1：从裂解缓冲液中提取大肠杆菌细胞的总 RNA，用研磨珠机械匀浆，而不是仅用裂解液进行裂解。在裂解液中进行机械均质化可产生稳定的 28 S/16 S 核糖体带和更高的核糖体完整性（RIN）。
如何消除 DNA 污染？
DNA 的存在会使基于 UV/VIS 的定量方法（如 Nanodrop）发生偏差，从而使得 RNA 的定量出现偏差，看着产量很高，但实际上 RNA 的量其实很少。在日常的实验里，可以将提取产物通过琼脂糖凝胶电泳来判断是否存在 DNA 污染。当 28 S RNA 上方出现其他片段时，就说明产物中含有 DNA（图 2）。可以使用 TRIzol 相分离、DNA 去除柱和 DNase 进行处理。
图 2：用琼脂糖凝胶电泳显示人类上皮细胞的 RNA 谱。使用简石生物试剂盒提取的 RNA 没有污染基因组 DNA
每一步都如履薄冰的 RNA 提取，需要大家的认真和谨慎对待。为了帮助大家更加简单、高效的完成 RNA 的提取，简石生物开发了一种新型的配合 TRIZOL 使用的 RNA 提取试剂盒，该试剂盒具有新的缓冲液和离心柱体系，可以在提取 RNA的同时消除 DNA 的影响。极大简化流程的同时也更好的保证来 RNA 的提取质量，让你的实验不再有烦恼。
为了进一步的方便大家的实验，本次特意为大家准备了两重福利。
福利一：TR205 RNA 提取试剂盒免费试用。
福利二：购买 RNA 提取试剂盒 1 盒（50 次）送 50 mL 的 Trizol 一瓶，全线保障你的 RNA 提取之路！
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同时，简石生物在 RNA 提取领域深耕多年，针对不同类型样本有着成熟的解决方案，下表为简石生物目前的产品清单，有需要的老师同学也可以通过阅读原文链接，对我们的产品进行进一步的咨询。
内容策划：邹礼平
内容审核：邱天天
题图来源：图虫创意
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