掉组织、高背景、有杂质？ 免疫荧光常见问题试试这 5 步！

最近又收到了

小师妹的疯狂轰炸

不是免疫荧光图出现问题

就是背景出现了问题...

为啥我的荧光染出来模模糊糊的

背景一点都不清亮？

上述的各种问题

大家在做 IF/IHC 的过程中

多多少少都会遇到

师姐建议

从以下 5 个角度 优化

01-灌流取材的问题

像上图二我们展示的有很多血管形状的染色并非特异性染色，而是我们在灌流取材的过程中并没有将动物体内的血流冲干净，所以导致了这种非特异性染色的出现。

02-切片的制备问题

载玻片是否使用明胶包被过这是一个重要问题！

有两种选择一是可以直接购买包被好的载玻片，二是自己使用明胶包被，如果所用载玻片没有经过包被，很可能你切片上的组织在遇见水后将会迅速与载玻片分手，老死不相往来！

那么我们前面的准备工作就将前功尽弃了。当这时所有的组织都飘在液体里的时候，「忙碌了一周的实验师傅准备组会挨骂」就可以了。

03-抗原修复大有文章

我们一般实验中都是使用柠檬酸盐溶液 pH 为6.0左右，经过一代一代的人也证明这个配方确实对于大多数的抗原是好用的。

但笔者之前在实验中就遇到一种抗体需要将抗原修复也配到偏碱性大约在pH 为8.0左右，抗体与抗原的结合才是更加特异的，所以这个抗原修复液的还是要根据各位实验的具体需求。

并不是传统的公认的就是好的，适合自己的才是最好的！

04-溶液杂质很讨厌

有的时候明明这个片子染得很漂亮，可他偏偏就出现图一那样的巨亮的点点，真让人崩溃！这时我们就要考虑一下自己所用的洗片子的溶液是否有结晶等东西造成了这种非特异性的染色，我们可以过滤一下溶液，看看是否可以去除这些杂质。

05-大力洗片子

还有就是在清洗片子时，放在摇床上要加大力度摇洗，否则组织上的杂质洗不干净，尤其在荧光二抗孵育结束后更要清洗干净，以防出现这种非特异性染色。

还有就是我们使用的荧光防淬灭的封片剂，注意用移液枪滴加的时候不要吸取到它的结晶部分哦。

形态学实验讲究很多，需要大家认真对待自己的样本和每一步细节操作，在收获结果的同时也做好数据分析处理哦。

今天给大家推荐【免疫组织荧光专题】【免疫组织化学专题】，针对 IF /IHC 中可能会遇到的问题进行解读。

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策划｜Olaf

作者｜草由八

配图｜丁香实验设计团队