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内毒素的检测——鲎试验法

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内毒素为革兰氏阴性细菌及其它一些微生物如衣原体、立克次氏体、螺旋体、单核细胞增多李斯特菌等胞壁中的类脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)成分。内毒素对机体有极为广泛的作用,可影响到机体几乎每一个器官、系统及生物功能。内毒素对机体有多种毒害作用,如热原性,致死作用,白细胞减少及增多,斯氏反应,弥漫性血管内凝血(DIC),骨髓坏死,胚胎骨质耗损,血压下降,血小板凝聚,补体激活,Hageman因子激活,诱导血浆原激活剂,促进前列腺素的合或,抑制糖原异生的关键酶,骨骼肌加速释放氨基酸等等。因此,临床上革兰氏阴性菌感染或脓毒症时,如并发毒血症和内毒素休克,可有许多病理现象出现。最终可因心、肾、肺、肝等功能的衰竭而发生死亡。

由于很小剂量的内毒素即能引起极广泛的生物作用及病理作用,因此,加强对内毒素检测的研究,便成为临床、公共卫生、药检系统等领域的重要课题之一。在临床上,加强对革兰氏阴性菌感染或革兰氏阴性菌菌血症、脓毒症时血清中内毒素检测,有利于及时发现内毒素休克的发生,以迅速采取果断的治疗。在公共卫生及药检系统等方面,对水源、食品、饮料、各种药物及生物制品进行内毒素检测,可严格控制水源水、食品、饮料、各种药物、生物制品中的内毒素含量,以将其控制在可接受的法定水平以下,有利于保证人民的身体健康。

鲎试验法

LT法又称鲎变形细胞溶解物试验(Limulus amoebocyte lysate,LAL),是目前检测内毒素最敏感的方法。它比RT法敏感10~100倍以上,可测出微量的内毒素(0.01~1 ng/m1 ) ,用微量光电法及其它的改进方法可测到微微克(Pg/ml)的水平。而在RT法中敏感性高的家兔需注射1.5ng/kg才能引起发热,而敏感性低的却需注射0.5-10ug/ kg才能引起发热。

LT法可广泛地用于革兰氏阴性菌感染的快速诊断,对患者的血液、尿液及脑脊液可进行直接的检查。此法亦可用于检查各种注射剂内是否有内毒素污染。近十多年来,随着各种先进的手段(如同位素标记技术,新频光电技术、免疫电泳技术等)应用于LT领域,使LT法得到了许多改进,敏感性又日益提高。

总之,从目前来看,LT法为检测内毒素的最好方法。其主要优点就是敏感性高,假阳性少,耗费的试剂量少,且设备简单,实验时间短,适用于临床、卫生事业及药检系统大规模地进行。如能解决好鲎试剂、内毒素及操作程序的标化问题,则LT法将是检测内毒素的最好方法。

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本文节选自:《内毒素的检测与鲎实验(一)》,文章作者:余庆。如有侵权,请联系删除,谢谢!

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