​实验室柱前衍生高效液相色谱检测发酵液中氨基酸苏氨酸含量

苏氨酸（Thr）是一种必需氨基酸，有4种异构体，天然存在并对机体有生理作用的是L-苏氨酸。在机体内的代谢途径和其他氨基酸不同，是唯一不经过脱氢酶作用和转氨基作用，而是通过苏氨酸脱水酶（TDH）和苏氨酸脱酶（TDH）以及醛缩酶催化而转变为其他物质的氨基酸，可以运用在医药、化学试剂、食品强化、饲料添加等多行业领域中。

L-苏氨酸的合成逐渐从化学合成被微生物发酵法所替代，发酵液中的氨基酸含量也从传统的纸层析法逐渐演变为高效液相色谱法，高效液相色谱法相较纸层析，精确度更高检测范围更广，固定相粒度更小（5μm-10μm）柱效更高。实验室查阅文献资料后今天分享一种利用柱前衍生化-高效液相色谱（HPLC）法测定发酵液中氨基酸苏氨酸含量的方法。

方法以2,4-二硝基氟苯（DNFB）为衍生剂，色谱分离柱：流动相A选择0.05mol/L的乙酸钠缓冲溶液，流动相选择60%的乙腈，配置试剂，试剂均用超纯水配置。流速选用1.0mL/min，柱温22℃，采用梯度洗脱，发酵液前处理及样品衍生方法，按色谱条件检验其它氨基酸的衍生物以及过量的DNFB是否对苏氨酸的分析产生影响。

精确称量0.1g苏氨酸样品，定容于100mL的容量瓶中，配成1g/L的标准溶液。分别稀释成不同的浓度的待测溶液，按上述色谱条件检测。以峰面积A对氨基酸的浓度（mg/L）进行线性回归，求出相关方程和相关系数。取苏氨酸标准溶液按上述色谱条件和测定方法进行连续测定，每次进样10μL，测定其峰面积。

结果表明苏氨酸在0.01～0.9g/L的浓度范围内与色谱峰面积A有较好的线性关系。相关系数>0.99，能够满足分析要求，可以用于苏氨酸含量的检测。氨基酸输液是临床用量很大的品种．苏氨酸是其主要成分之一；另外苏氨酸等氨基酸在保健品、化妆品等行业需求正盛，在产量上存在着缺口，需要对含量进行测试，微源检测遵照ISO17025和GMP进行实验室管理，申请并通过了中国计量认证（CMA）资质认定，专注为产品生产过程中可能产生的杂质提供评估报告、方法开发、验证及样品检测等一系列完整的解决方案。更多检测问题欢迎私信及评论区留言！

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