上海
在新办药典在无菌检查的薄膜过滤法中收载了使用微生物限度薄膜过滤器的方法.使需要用薄膜过滤器的药物(输液.抗生素等)的无菌试验操作简便易行.降低了出现假阳性的可能。在微生物限度的控制菌检查中,当供试品含抑菌成分时.也可使用薄膜过滤法排除其抑菌作用,但药典尚未提及使用封闭式薄膜过滤器(-次性),本实验采用封闭式过滤器对含抑菌成分的3种外用液体药物(聚维閘碘溶液.冰醋酸涂剂,水杨酸醇溶液)进行控制菌检查.并和药典法比较,有方便易行,降低出现假阳性可能的优点。
1仪器与材料
智能集菌仪,微生物限度薄膜过滤器(一- 次性)(那艾仪器NAI-XDY-3C),玻璃过滤器(微孔滤膜0.45pm) ;胆盐乳糖增菌液(下称BL) ,营养肉汤培养基.溴化十六烷基三甲铵琼脂培养基，甘露醇高盐琼脂培养基(中国药品生物制品检定所) ;0.9%无菌氯化钠溶液(下称稀释剂)(自制) :金黄葡萄球菌.铜绿假单胞菌:聚维削碘溶液 .5%水杨酸醇溶液.5%冰醋酸涂剂
2方法与结果
按照《中国药典》2000年版)微生物限度检查法(附录XIJ)和(药品卫生学检验方法)中的薄膜过滤法进行。
2.1供试液的制备
取样品10mL.加稀释剂90ml,摇匀,成1 : 10供试液备用。
2.2苗液的制作
取金黄葡萄球菌,铜绿假单胞菌的营养琼脂培养物接种于营养肉汤培养基中,37C培养18hr,取该培养液1mL用稀释剂稀释成每毫升含50~ 100个的阳性对照菌液备用。
2.3薄膜过滤法
2.3.1取一封闭式过滤 器(三连),先夹住其中二管滤器的通道,将100mL稀释剂通过未夹住的另一管滤器,作阴性对照管。然后夹住这一-管道,放开另二管的夹子。取供试液20mL,置含稀释剂200ml,的具塞盐水瓶中,摇匀,通过未夹住的二管滤器。放开夹子,用稀释剂冲洗滤器3次,每次300mL(各管100mL) ,再将BL 300mL加至封闭式过滤器内(各管100mL).其中1管中加铜绿假单胞菌阳性对照菌液。培养24h再将上述培养液划线接种于溴化十六烷基三甲铵琼脂培养基平板上,培养24h,观察。
另取供试液20mL.同法,只将营养肉汤培养基代替Bl,甘露醇高盐琼脂培养基平板代替溴化十六烷基三甲铵琼脂培养基平板.作金黄葡萄球菌控制菌的检查.
2.3.2用M-50型玻璃过滤器,取供试液40mL,置稀释剂100ml.中,摇匀,倒人装配好消毒过的滤器内,减压抽干后用稀释剂冲洗滤膜3次.每次100ml.,取出滤膜剪成4片,分置于BL和营养肉汤培养基中作增菌培养(各有一份作阳性对照),24 h后在相应平板上划线.培养24h后观察。
药典的薄膜过滤法.实验前需浸膜、装配、高压蒸汽灭菌.安装滤膜的时候要注意滤膜与滤器密合,防止滤膜破损.漏液,准备工作较复杂.实验中.需将滤膜剪成4块,无菌操作要求高，操作不当.有可能出现假阳性。如用一次性封闭式过滤器,则简便易行，降低出现假阳性的可能，有明显的优点。
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