AbMole精研抑制剂十年，最新的科研动态不断与您分享。本期与您分享的是：丝氨酸蛋白酶抑制剂肽酶抑制剂进化枝C成员1的敲低抑制NPC细胞的生长。
Serpin 肽酶抑制剂进化枝 C 成员 1 （SERPINC1) 在抗凝和抗炎中发挥作用。本研究的目的是研究SERPINC1在NPC细胞增殖和凋亡中的作用。此外，SERPINC1 基因在 HNE3 细胞系中使用靶向 SERPINC1 的短干扰 RNA (SERPINC1-siRNA) 沉默。通过 Cell Counting Kit-8 测定确定细胞活力；此外，通过流式细胞术研究增殖和凋亡。进行蛋白质印迹和逆转录-定量聚合酶链反应分析以确定蛋白质和mRNA的表达水平。结果表明，与邻近健康组织相比，NPC组织中SERPINC1 mRNA和蛋白质的表达水平增加。SERPINC1-siRNA转染后HNE3细胞中SERPINC1 mRNA和蛋白的表达降低。此外，敲除 SERPINC1 可促进细胞凋亡并抑制增殖。还证明沉默 SERPINC1 上调Bcl-2相关 X 蛋白和 p53 mRNA 和蛋白的表达，并下调 Bcl-2、存活蛋白和细胞周期蛋白 D1 的表达。SERPINC1 的下调降低了磷脂酰肌醇 3-激酶 （PI3K)、蛋白激酶 B (Akt） 和哺乳动物雷帕霉素靶标 (mTOR） 的磷酸化。因此，敲低SERPINC1可能通过抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路促进HNE3细胞凋亡并抑制增殖。
Phosphatase inhibitors（Abmole，M752）在Western blot实验中用于防止研究中蛋白和脂类的磷酸化状态丢失，为蛋白磷酸化提供更加全面的保护。
Figure 1. Expression of SERPINC1 in NPC tissues.
进行RT-qPCR和蛋白质印迹分析NPC和邻近健康组织中SERPINC1的表达水平。 结果表明，与邻近组织相比，NPC组织中 SERPINC1 蛋白和 mRNA 的表达水平显著增加（P<0·05；图 1A-C）。
Figure 2. Effects of SERPINC1‑siRNA transfection on the expression of SERPINC1 and the viability of HNE3 cells.
SERPINC1-siRNA 转染效率通过 RT-qPCR 和蛋白质印迹分析确定。结果表明，与阴性 siRNA 转染（空载体）对照组相比，SERPINC1 敲低后 HNE3 细胞中 SERPINC1 mRNA 和蛋白质的表达水平显著降低（P<0·01；图 2A-C）。
Figure 4. Effects of SERPINC1‑siRNA transfection on the expression of apoptosis and cell cycle‑associated genes in HNE3 cells.
为了进一步研究 SERPINC1 敲低对 HNE3 细胞增殖和凋亡的影响，进行了 RT-qPCR 和蛋白质印迹分析以确定凋亡相关（Bax、Bcl-2 和存活蛋白）和细胞周期相关的表达、cyclin D1 和 p53) 基因和蛋白质。结果表明，与空载体组相比，SERPINC1-siRNA转染细胞中Bax mRNA的表达水平显著上调，而Bcl-2和survivin mRNA的表达水平下调（P<0·01；图4A-C）。
鸣谢：Jin Xu, et al. Mol Med Rep. 2019 May;19(5):3658-3666.
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