动物实验 | 有助于增强免疫力功能实验服务

推荐用近交系小鼠，18-22g，单一性别，每组10-15只。

剂量分组及受试样品给予时间

实验设三个剂量组和一个阴性对照组，以人体推荐量的10倍为其中的一个剂量组，另设二个剂量组，必要时设阳性对照组。

受试样品给予时间30天，必要时可延长至45天。免疫模型动物实验时间可适当延长。

试验项目

1.体重

2.脏器/体重比值测定：胸腺/体重比值，脾脏/体重比值

3.细胞免疫功能测定：小鼠脾淋巴细胞转化实验，迟发型变态反应实验

4.体液免疫功能测定：抗体生成细胞检测，血清溶血素测定

5.单核—巨噬细胞功能测定：小鼠碳廓清实验，小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验

6.NK细胞活性测定

结果判定

1.有助于增强免疫力功能判定：在细胞免疫功能、体液免疫功能、单核—巨噬细胞功能、NK细胞活性四个方面任两个方面结果阳性，可判定该受试样品具有有助于增强免疫力功能作用。

2.其中细胞免疫功能测定项目中的两个实验结果均为阳性，或任一个实验的两个剂量组结果阳性，可判定细胞免疫功能测定结果阳性。

3.体液免疫功能测定项目中的两个实验结果均为阳性，或任一个实验的两个剂量组结果阳性，可判定体液免疫功能测定结果阳性。

4.单核—巨噬细胞功能测定项目中的两个实验结果均为阳性，或任一个实验的两个剂量组结果阳性，可判定单核—巨噬细胞功能结果阳性。

5.NK细胞活性测定实验的一个以上剂量组结果阳性，可判定NK细胞活性结果阳性。

实验方法

1.ConA 诱导的小鼠脾淋巴细胞转化实验

当T淋巴细胞受ConA刺激后发生母细胞发生增殖反应，活细胞特别是增殖细胞中的线粒体水解酶可将MTT(一种淡黄色的唑氮盐)分解为兰紫色结晶，其光密度值能反映细胞的增殖情况。

2.迟发型变态反应(DTH)

2.1 二硝基氟苯诱导小鼠DTH(耳肿胀法)

二硝基氟苯(DNFB)稀释液可与腹壁皮肤蛋白结合成完全抗原，由此刺激 T 淋巴细胞增殖成致敏淋巴细胞。4～7天后再将其涂抹于耳部进行抗原攻击，使局部肿胀，一般在抗原攻击后24～48h达高峰，其肿胀程度可以反应映迟发型变态反应程度。

2.2 绵羊红细胞(SRBC)诱导小鼠DTH(足跖增厚法)

SRBC可刺激T淋巴细胞增殖成致敏淋巴细胞，4天后，当再以SRBC攻击时，攻击部位出现肿胀，其肿胀程度可反映迟发型变态反应程度。

3.抗体生成细胞检测(Jerne改良玻片法)

经过绵羊红细胞(SRBC)免疫的小鼠脾细胞悬液与一定量的SRBC混合，在补体参与下，使分泌抗体的脾细胞周围的SRBC溶解，形成肉眼可见的空斑。溶血空斑数可反映抗体生成细胞数。

4.血清溶血素的测定

4.1 血凝法

用SRBC免疫动物后，产生抗SRBC抗体(溶血素)，利用其凝集SRBC的程度来检测溶血素的水平。

4.2 半数溶血值(HC50)的测定

用SRBC免疫动物后，血清中出现SRBC抗体(溶血素)，在补体参与下，与SRBC一起孵育，可发生溶血反应，释放血红蛋白，通过测定血红蛋白含量反映动物血清中溶血素的含量。

5.小鼠碳廓清实验

在一定范围内，体内碳颗粒被清除速率与血碳浓度呈指函数关系。

以血碳浓度对数值为纵坐标，时间为横坐标，两者呈直线关系。此直线斜率(K)可表示吞噬速率。动物肝、脾重量影响吞噬速率，一般以校正吞噬指数a表示。

6.小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验

6.1 小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验(滴片法)

利用巨噬细胞对光滑表面如玻璃表面具有粘附的特性，将含有巨噬细胞的腹腔液滴于载玻片上，加入鸡红细胞，孵育一定时间后，冲洗掉未粘附的细胞，固定染色，在显微镜下计数吞噬鸡红细胞的巨噬细胞的吞噬率和吞噬指数，据此判定巨噬细胞的吞噬能力。

6.2 小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验(半体内法)

在体内腹腔巨噬细胞能吞噬鸡红细胞。据此判断巨噬细胞的吞噬功能。

7.NK细胞活性测定

正常情况下，活细胞胞浆内的含有LDH不能透过细胞膜，当细胞受到NK细胞的杀伤后，LDH释放到细胞外。LDH可使乳酸锂脱氢，进而使NAD还原成NADH，后者再经递氢体吩嗪二甲酯硫酸盐(PMS)还原碘硝基氯化四氮唑蓝(INT)，INT 接受H+被还原成紫红色甲臜类化合物。在酶标仪上用490nm比色测定。

可根据具体实验需求进行实验方法的筛选。

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