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实验室血清学解释常犯的七类错误(2)

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原文名:Common Mistakes in Interpretation ofPopulation Serology

著者:Gregory W. Stevenson

(接昨日内容)

如何有效利用群体血清学数据是很复杂的,需要预防兽医对体液免疫应答、血清学试验类型及其总体敏感性和特异性、猪群中特异性传染因素的流行病学和统计学有基本了解。过去的 10 年,在杂志和会议论文集中有关这些论题的综述性文章超过 40 篇之多。最全面的七个方面列于诸多文献中,以下是核心大纲。

错误 2 : 在努力解释结果前的无效计划或模糊推理

为了回答清楚特别的问题,只有实施科学有效的计划,才能作出血清学结果的正确解释。对为什么进行血清学有许多不同的理由,例如,在购入种猪前为了确定一个猪群是否感染某些微生物,为了消灭疾病,为了监测感染/疾病,为了确定病因等等。

血清学试验的目的决定了采样策略和血清学试验的选择。反过来这些决定又影响结果的质量和从结果中能否得出有意义的结论。常见的是由于采样策略不佳和/或检测方法选择不当导致结果得不出有意义的解释。遗憾的是,结果总能作出错误的解释。进行血清学的理由和适宜的策略如下:

为了在一个群体中检测某种感染的存在,即在该群体中是 X 因子、Y 因子还是 Z 因子阳性?典型地用于疾病净化或选配健康种畜。 被检测的群体应是群体中最可能新近发生感染的。 如果在群体中存在有怀疑因子新近感染的临诊症状动物待检查,那就应检查这些动物,否则应当按随机法选择动物进行检查。

欲检查的动物数量可以从统计学教材上找到一张表来确定。人们必须估测阳性动物的期望流行率,即如果群体中阳性动物的流行率为 50%时,与阳性动物的流行率只有10%时相比,只需检查更少的动物,就能以 95%的置信区间检测到一个阳性动物。

在未进行免疫接种的情况下,一种阳性的试验表明该个体或群体曾经与这种试验的微生物有过接触。但如果仅单个动物检测为阳性,那这个试验可能是假阳性。在对该群体作出受感染的结论之前,谨慎地提出增加其它试验。阳性动物应当用检查相同微生物的同一试验或其它试验来再行检查。此外,应加大检测量以增加发现其它阳性动物的机会(或增加阴性结果中的置信度)。

置信度 95%时检测至少有单个阳性动物所需的样本大小

要对一个群体中的部分群体进行血清流行率监测,即在当今生产系统中,在每一年龄/地区群体中的哪一部分对 X、Y 或 Z因子血清中转阳…..有关母源抗体衰减、免疫接种应答或该群体中病因的流行病学,这些亚群间的血清流行率差异说明什么?

从每一个年龄组或每一畜舍采血的猪代表了一个单独的群体。每个群体采血的数目愈大,对每个群体真正的血清流行率预测愈准确。同理,从每个群体中采血的猪数目多一些,对不同群体之间血清流行率解释的显著性差异就小一些。

下面将讨论确定样本大小和确定群体间有显著性意义的统计学方法:

如果监测疫苗接种后的应答,相信所选择的血清学试验能以适宜的敏感性检测针对疫苗的抗体。记住,许多因素可能影响群体中传染因子的流行病学。普通来源的所有猪,它们在同一地方或不同地方而年龄不同和畜舍不同,不一定以相同时间顺序和在相同比率通过各种因子的传染进程。因此,现场采血可能会导致有些模糊的结果或难以前后重复的结果。

为了监测在一个系统内疫苗接种的反应,即每个认定疫苗接种群体中的哪一部分发生血清转阳?当已知动物在疫苗接种时为血清学阴性或具有低水平的母源抗体效价,这种状况证明所有猪中有望对疫苗产生应答,此种情况下免疫接种最好。在断奶猪中有明显母源抗体效价时,那么就可以作出疫苗干扰的解释和有关于反应(疫苗贮存和使用)无效的判断。

每种疫苗接种后在适宜时间内,必须对动物进行采样,即当所有动物有望于血清转阳时….通常这个时间为 3 周。在这个试验中,所检查的动物数量直接影响所产生非应答的(阴性试验数目)估测准确性, 这些是如上所述相同的统计学问题。例如,假定进行猪肺炎支原体疫苗接种,当进入一个 1000 头保育群,8 周后离开时再测试,预测 20%非反应,根据不同样本大小,95%置信区间应是多少?应用标准表,采样大小为 10,区间是 3-56%,采样大小为 20,区间是 6-44%,采样大小为 40,区间是 10-37%,很显然,需要相当大的数量才能得出有意义的结论。

通过多种血清学阳转以确定临诊疾病的原因,即什么因素或多种因素的联合作用是此发病率和/或死亡率的原因?血清学只是推断临床病因的一种间接方法,决不应当取代直接诊断法,如结合传染因子确证的特征性病变证明。

每隔四周对一群猪连续采血,而且血清转阳或抗体效价增高 4 倍或更高与临床疾病正相关,是最简单的解释和血清学诊断疾病最有说服力的应用。血清应冻存,所有样本一起交送以作同一批检查。猪只数量有时不定,但是,因为人们常常不能预测什么时间和有多少临床患病。进行大群采血和保管每次采血时每头猪临床情况的记录为好。从有代表性患病猪中取部分血清送往检查。

现场采血检测有快速的优点,也能使人选择临诊明显未患病(假急性样本)和那些患过病(康复样本)的年龄组进行采血,有时解释不如连续采血或其它原因应用现场采血那么容易。 证实统计学明显血清转阳或提高群体之间的平均效价不仅有困难,而且不能确切知道该组中每头猪何时患病也有困难。因为这些困难,当对样本的几种因子进行血清学检查时,常不可能清楚地将发病与单个因子的血清转阳相联系。明天我们将更详细地讨论这个问题。

(未完待续)

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