责编 | 酶美
巨噬细胞是肿瘤组织局部数量最多的一群免疫细胞，功能上具有高度异质性，对肿瘤的发生发展起重要的调控作用。靶向肿瘤相关巨噬细胞，诱导其免疫刺激活性以增强抗肿瘤T细胞应答成是有效的肿瘤免疫治疗策略。
C-C Motif Chemokine Receptor Like 2 (CCRL2) 最早从LPS刺激的巨噬细胞上克隆而来，最初命名为LPS inducible C-C chemokine receptor related gene (L-CCR)【1】。静息状态的免疫细胞不表达CCRL2；在某些病理状态下，活化的中性粒细胞和树突状细胞上调表达CCRL2；研究者利用小鼠风湿性关节炎模型和过敏性哮喘模型，揭示了CCRL2介导炎性细胞的迁移，发挥促炎效应【2，3】。CCRL2随后被鉴定为视黄酸受体应答基因2编码的蛋白Chemerin的受体之一【4】。最近的研究显示血管内皮细胞表达CCRL2通过富集Chemerin，协助Chemerin介导CMKLR1+ NK细胞的迁移，从而抑制小鼠肺癌【5】。然而，对CCRL2是否调控巨噬细胞功能及在肿瘤免疫中所起的作用仍不清楚。
2021年4月13日，复旦大学基础医学院免疫学系何睿课题组在PNAS在线发表了题为CCRL2 promotes anti-tumor T cell immunity via amplifying TLR4-mediated immunostimulatory macrophage activation 的研究长文，显示CCRL2的上调表达促进巨噬细胞的免疫刺激活性，增强抗肿瘤T细胞免疫；并进一步揭示了CCRL2增强巨噬细胞免疫刺激活性的分子机制。
该研究首先通过分析TCGA数据库，发现多种类型肿瘤中CCRL2的高表达与抗肿瘤T细胞的强度呈显著正相关。利用小鼠黑色素瘤模型发现，Ccrl2-/-小鼠的黑色素瘤加速生长，伴随着明显减弱的T细胞免疫应答。利用骨髓嵌合体小鼠证实了免疫细胞表达的CCRL2发挥抑癌效应。进一步清除CD8+T细胞，而不是CD4+T细胞，可完全消除野生型（WT）和Ccrl2-/-小鼠之间黑色素瘤生长的差异，提示CCRL2的抑癌效应依赖于CD8+T细胞介导的抗肿瘤免疫。有意义的是，该研究显示T细胞并不表达CCRL2，而是免疫刺激活性的MHCII+肿瘤相关巨噬细胞选择性表达CCRL2，其表达水平随着肿瘤的进展而下调。在体外，LPS/IFN-和黑色素瘤细胞系B16F10上清可分别诱导骨髓来源巨噬细胞表CCRL2，此效应依赖于TLR4，而免疫抑制因子如IL-4/STAT6或酸性环境可抑制CCRL2的表达。利用组化染色和分析单细胞测序数据，证实了人黑色素瘤相关的巨噬细胞也选择性表达CCRL2。
进一步，该研究证实CCRL2促进巨噬细胞免疫刺激活性。首先，Ccrl2-/-小鼠黑色素瘤巨噬细胞的免疫刺激表型受损，体外极化实验显示CCRL2缺失显著抑制LPS/IFN-诱导的M1型巨噬细胞活化，但不影响IL-4诱导的M2型活化。其次，体外共培养显示Ccrl2-/-巨噬细胞再活化OT1CD8+T细胞的能力下降；体内共注射模型显示，与LPS/IFN-刺激的WT巨噬细胞相比，同样处理的Ccrl2-/-巨噬细胞抑制B16F10体内生长的能力明显低下，且抗肿瘤T细胞应答减弱。最后，脂质体清除巨噬细胞完全消除了WT和Ccrl2-/-小鼠之间黑色素瘤生长和抗肿瘤T细胞应答强度的差异。
该研究进一步揭示了CCRL2的表达增强巨噬细胞免疫刺激活性的分子机制，通过CO-IP和NanoBIT活细胞实时蛋白互作检测显示CCRL2与TLR4相互作用。LPS/IFN-或肿瘤细胞上清刺激的Ccrl2-/-巨噬细胞膜TLR4的水平显著低于同样处理的WT巨噬细胞，Ccrl2-/-小鼠肿瘤相关巨噬细胞的膜TLR4水平低于WT对照。与此一致，Ccrl2-/-巨噬细胞膜TLR4下游MyD88-NF-kB信号活化明显降低。
综上，该研究最重要发现是TLR4激动剂诱导巨噬细胞表达CCRL2，反过来，CCRL2通过与TLR4互作，维持膜表面TLR4水平，放大下游MyD88-NF-kB通路活化，增强巨噬细胞的免疫刺激活性，从而提高抗肿瘤T细胞免疫，抑制肿瘤的进展。该研究结果也提示了CCRL2作为评价肿瘤免疫应答强度的生物标志物和潜在肿瘤免疫治疗靶点的可能性。
复旦大学基础医学院免疫学系何睿课题组已毕业的尹薇博士为本文的第一作者，何睿教授为通讯作者。该研究获得了中国科学院分子细胞科学卓越创新中心陈剑峰研究员和复旦大学基础医学院免疫学系严大鹏研究院在细胞互作实验的帮助，以及波士顿大学张家瑞博士在生物信息学分析方面的协助。
原文链接：
https://www.pnas.org/content/118/16/e2024171118
参考文献
1. Shimada T, et al. A novel lipopolysaccharide inducible C-C chemokine receptor related gene in murine macrophages [J]. FEBS Lett, 1998, 425(3): 490-4.
2. Otero K, et al. Nonredundant role of CCRL2 in lung dendritic cell trafficking.Blood 116 2942-9 (2010).
3. Del Prete A, er al. The atypical receptor CCRL2 is required for CXCR2-dependent neutrophil recruitment and tissue damage. Blood 130 1223-1234 (2017)
4. Zabel, BA, et al. Mast cell-expressed orphan receptor CCRL2 binds chemerin and is required for optimal induction of IgE-mediated passive cutaneous anaphylaxis. J Exp Med 205 2207-20 (2008).
5. Del Prete A, et al. The Atypical Receptor CCRL2 Is Essential for Lung Cancer Immune
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