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基因慧
《医疗机构临床实验室管理办法》、《三级综合医院评审标准（2011年版）》等文件中指出，在临床检测报告中的项目均应开展内部室内质控，并参加外部室间质评。在这两项工作当中，标准物质的作用尤为重要，对它的管控不可或缺。
文章 | 菁良基因
编辑 | 齐艺萌 关键词 | 产业技术
一、标准物质（质控品）的来源与基本条件
分子实验室中，一般将标准物质分成两类：
1、用于仪器校准、验证、测试和绘制工作标准曲线等目的的标准物质（一般是由厂商提供的质控品）；
2、用于外部室间质评、内部室内质控、方法验证等目的的标准物质。
在《2021临床医学检验技术（士）》中，第二类标准物质又分为标准品和质控品两类（一般为第三方提供的标准品、实验室自制质控品）。根据GB/T 20468-2006《临床实验室定量测定室内质量控制指南》，对于这类标准物质的要求共分为六个方面：
① 基质：应尽可能与临床样本的基质相似或一样，不同基质中可能含有不完全一致的基因扩增检测抑制物，应对测定结果无影响；
② 浓度：在测定范围内，质控品要求其所含待测物的浓度尽可能接近试验或临床决定性水平；
③ 具备均匀性和稳定性，瓶间变异性应小于分析系统的变异，在规定的条件下有良好的稳定性；
④ 靶值或预期结果已知；
⑤ 无已知的生物传染危险；
⑥ 可单批大量获得，因室内质控是连续测定同一质控品，以监测实验室测定的重复性（可大量持续供应）。
二、标准物质（质控品）的验收与保存
参照JJF 1507-2015 《标准物质的选择与应用技术规范》（以下简称“JJF1507-2015”）关于标准物质（质控品）的验收与保存相关描述，整理如下：
1. 在接收标准物质时，应对照提供的说明确认其运输条件和接收状态，并立即按照说明规定的保存条件进行保存，并在保质期内使用 （参考JJF1507-2015 10.1.1、10.1.3） 。对于核酸标准物质，《医疗机构临床基因扩增检验实验室工作导则》中指出试剂盒中的阳性对照品及质控品应当保存在标本处理区。
2. 对于可多次使用的标准物质，确保包装单元开封后的恰当保存和包装、标签、说明规定的完整性非常重要，必要时应对剩余的物质进行重新密封包装 （参考JJF1507-2015 10.1.2、10.2.4） 。
3. 对于仅供一次使用的标准物质，在打开包装后应按照要求尽快使用，不能留存后反复使用 （参考JJF1507-2015 10.1.3） 。
三、标准物质（质控品）的使用
参照JJF1507-2015关于标准物质的使用方面相关描述，整理如下：
1、 使用前准备：
在规定的程序条件和测量条件达到稳定后再使用标准物质，否则将造成标准物质的误用，并可能产生错误的结论（参考JJF1507-2015 10.2.1、10.2.5）。
2、 预处理：
对于需通过混合、稀释、分装等预处理后的标准物质，需要对不确定度的来源进行控制，如溶质或溶剂的挥发性损失、包装和环境，还有测定方法、缓冲液、最终结果的统计学评价和质量控制等。为确保特性值的正确传递，避免预处理过程因素的影响，建议对预处理进行验证评估，必要时建立不确定度评估程序，以确保不确定度的合理量化（参考JJF1507-2015 6.3.3、10.2.6、《2021临床医学检验技术（士）》）。
注：ISO指南34和35对标准物质的稳定性评估进行了详细阐述，上述两份指南已转化为国家计量技术规范JJF1342《标准物质研制(生产) 机构通用要求》和JJF1343《标准物质定值的通用原则及统计学原理》。同时，在体外诊断试剂方面发布的YY/T 1652《体外诊断试剂用质控物通用技术要求》亦可作为参考文件。
3、 取样：
标准物质在取样时应确保代表性，如果规定了取样之前必要的均匀化措施，如混匀等，应严格执行。
如果规定了标准物质的最小取样量，那么使用标准物质时的实际取样量应不低于标准物质的最小取样量，当小于最小取样量时，其特性值和不确定度等参数可能会由于标准物质的不均匀性而不再有效（参考JJF1507-2015 10.2.2）。取样时应采取防止污染的措施（参考JJF1507-2015 10.2.4）。
对于核酸标准物质的使用，还需注意：
（1）对于液体状态，在开盖前离心以防产品损耗，并按照说明中的稀释、分装建议进行操作；
（2）对于石蜡切片（如FFPE），应对核酸提取步骤，应建立技术标准、操作与质控规程并保存过程记录；
（3）冻干状态的核酸标准物质的在进行复溶时，所加溶剂的量要准确，每次加入的量尽量一致，应轻轻摇匀，使内容物完全溶解，切忌剧烈振摇。
4、使用
对于定性检测，通常有弱阳性质控品和阴性质控品可以满足要求。
对于定量检测，则要根据实验的测定范围。使用阳性质控品不但可检测扩增反应液的质量，还可获得检测试剂的检测的下限信息。使用阴性质控品主要目的是监测污染，包括实验室以前的扩增产物的污染、有实验操作所致的标本之间的交叉污染、扩增反应试剂的污染等。
四、部分文件提到的第三方质控品相关建议
第三方质控品不仅可使用在实验室的方方面面，而且在临床检验中也起到不可忽视的作用：
1. ISO 15189：2012（《Medical laboratories — Requirements for quality and competence》）提到“Use of independent third party control materials should be considered, either instead of, or in addition to, any control materials supplied by the reagent or instrument manufacturer”，其建议实验室使用『独立』第三方质控品。
2. 根据临床实验室标准化协会CLSI发布的CLSI C24-Ed3（《Clinical and Laboratory Standards Institute guideline C24—Statistical Quality Control for Quantitative Measurement Procedures: Principles and Definitions》的第三版，中所提“Control materials made by a third party that has no relationship to the measurement procedure manufacturer or to the calibrator, sometimes referred to as third party controls, are developed independently without any influence from the instrument or reagent manufacturer”，强调第三方质控品不受任何仪器或者试剂厂商的影响。
3. 卫生部临床检验中心发布的GB/T 20468-2006《临床实验室定量测定室内质量控制指南》中提到，每一个分析批长度内至少对质控品做一次检测、分析系统或试剂的厂商应推荐每个分析批使用质控品数量及放置位置。在PCR检测中，从核酸提取到扩增即为一个分析批。
4. 在联防联控机制医疗发布的《医疗机构新型冠状病毒核酸检测工作手册（试行 第二版）》中，关于实验室质量控制与管理的部分提到：“室内质控每批检测至少有1份弱阳性质控品（第三方质控品，通常为检出限的1.5-3倍）、3份阴性质控品（生理盐水）。质控品随机放在临床标本中，参与从提取到扩增的全过程……”
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参考资料：
1、《三级综合医院评审标准（2011年版）》（卫医管发〔2011〕33号）
2、《医疗机构临床实验室管理办法》（卫医发[2006]73号）
3、《医疗机构临床基因扩增检验实验室管理办法》（卫办医政发[2010]194号）及附件医疗机构临床基因扩增检验实验室工作导则
4、《2021临床医学检验技术（士）》（人民卫生出版社 2020年11月第1版）
5、GB/T 20468-2006临床实验室定量测定室内质量控制指南（中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局、中国国家标准化管理委员会发布于2006-09-01，起草单位：卫生部临床检验中）
6、JJF 1507-2015 《标准物质的选择与应用技术规范》（国家质量监督检验检疫总局发布于2015-01-30，主要参照ISO指南33）
7、检验医学实验室质量管理指南（上海科学技术文献出版社2014年3月第1次印刷）
8、YY/T 1652-2019《体外诊断试剂用质控物通用技术要求》（国家药品监督管理局发布于2019-05-31）
9、ISO 15189：2012 Medical laboratories — Requirements for quality and competence
10、CLSI C24-Ed3 Clinical and Laboratory Standards Institute guideline C24—Statistical Quality 8、Control for Quantitative Measurement Procedures: Principles and Definitions
11、关于印发医疗机构新型冠状病毒核酸检测工作手册（试行 第二版）的通知（联防联控机制医疗发〔2020〕313号）
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