甜茶叶多糖的表征、体外抗氧化活性与体内毒性

多糖通常是由多个单糖分子聚合、脱水形成的一类分子结构复杂的多羟基聚合物。多糖来源广泛，根据来源不同可分为植物多糖、细菌多糖、真菌多糖和动物多糖。植物多糖普遍存在于自然界中，研究者已从各类植物中提取并分离出不同结构的多糖。近年来，对植物多糖的研究逐渐增多，主要集中在多糖的提取、分离纯化、含量测定、结构分析、药理及生物学功能等方面。植物多糖研究的深入为活性多糖产品的生产开发奠定了基础。

甜茶（ Rubus suavissimus S.Lee ），又名甜叶悬钩子，为蔷薇科悬钩子属多年生有刺灌木，因其叶片味甜，故称为甜茶，是广西、贵州、湖南等地区长期以来食用的甜味品种茶。甜茶中含有茶多酚、黄酮、多糖及糖苷类等多种物质。关于甜茶叶的研究主要集中在甜茶苷、多酚等物质，其多糖组分的研究相对空缺。甜茶作为“茶、糖、药”的植物来源，具有重要的研究价值。

因此，北京化工大学生命科学与技术学院的教小磐、刘云*提取了甜茶叶中的多糖组分，测定了其总糖含量及单糖组成，并对其体外抗氧化活性及生物体内毒性进行了相关研究，以期为甜茶多糖的综合利用提供理论依据。

1 甜茶多糖总糖含量与单糖组成分析结果

混合单糖标准品衍生液的高效液相色谱图如图1A所示，8 种单糖混合标准液衍生物在该色谱条件下实现了较好的分离。根据各单糖出峰时间、峰面积绘出各单糖的标准曲线，结果显示，所测定的8 种单糖标准品的峰面积与标准品质量浓度呈良好的线性关系，拟合度较高。衍生化的甜茶多糖水解液在相同的色谱条件下进行测定，结果见图1B。结果表明，甜茶多糖主要由甘露糖、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖、岩藻糖组成，其物质的量比为1.17∶21.79∶3.54∶1.00∶1.33∶2.86。其中鼠李糖含量最高，半乳糖含量最低。图1B中30.50min的新峰已验证不是葡萄糖醛酸和半乳糖醛酸，分析可能是一种新的糖醛酸，与傅里叶变换红外光谱结果中含C＝O的伸缩振动峰相对应。由于其含量较低，因此未做进一步检测。

2 甜茶多糖的傅里叶变换红外光谱分析结果

如图2所示，甜茶多糖样品在4 000～500cm -1 区具有多糖类物质的一般特征。3 295、2 936、1 597、1 417、1 337、1 233、1 148、1 035、982、896、825cm-1均有特征吸收。3295cm-1附近的强宽谱带是糖类—OH的伸缩振动吸收峰，2936cm-1附近的吸收峰是甲基或亚甲基的C—H伸缩振动峰，1 200～1420cm-1附近的吸收峰是C—H的弯曲振动峰，与C—H的伸缩振动构成了糖环的特征吸收。1597cm-1附近的吸收峰是C＝O的伸缩振动峰，同时与吸收的水相关，说明甜茶多糖对水有较强的亲和力。980～1200cm-1的吸收峰为吡喃糖环的伸缩振动峰，证明甜茶多糖样品中单糖以吡喃糖苷的形式存在，与单糖组成结果一致。825cm-1和896cm-1的吸收峰分别代表α与β类型的糖苷键。

3 甜茶多糖的抗氧化能力分析结果

3.1 总还原力分析结果

还原力是评价天然产物抗氧化能力的重要指标。溶液的吸光度越大，其还原力越强。结果显示，随着多糖质量浓度的增加，吸光度增大，其还原力增强，但均低于同等质量浓度VC的还原力。甜茶多糖具有一定的还原力，但与VC相比较弱。

3.2 甜茶多糖DPPH自由基清除能力分析结果

由图4可知，在0.2～1.0mg/mL的质量浓度范围内，甜茶多糖对DPPH自由基清除能力呈现出剂量依赖性，在质量浓度为1.0mg/mL时，甜茶多糖的DPPH自由基清除率达到63.7%，低于1.0mg/mLVC的清除率（94.5%），但甜茶多糖来源于天然产物，相比而言其清除能力较强。结果表明，水提甜茶多糖具有较强的DPPH自由基清除能力。

3.3 甜茶多糖·OH清除能力分析结果

结果显示，随着多糖质量浓度的增加，其·OH清除能力增强，并呈现一定的剂量依赖性。在质量浓度为1.0mg/mL时，甜茶多糖的·OH清除率为34.5%，与VC在0.2mg/mL时的清除率相当，证明甜茶多糖具有一定的·OH清除能力。

4 甜茶多糖对斑马鱼胚胎和幼鱼毒性分析结果

受精后发育至6 h的斑马鱼胚胎和受精后发育至3 d的幼鱼（图6）分别置于不同质量浓度的甜茶多糖溶液的毒性表型和毒性实验结果果如表2所示。由表2、图6可知，在0.1、1.0、2.5mg/mL的质量浓度下，甜茶多糖均未表现出对斑马鱼胚胎和幼鱼的致畸和致死作用，表明甜茶多糖具有一定的安全、低毒特点。采用斑马鱼作为模型生物简便可行、稳定可靠、预测性好，能够为甜茶多糖的生物应用提供理论依据。

结 论

本实验以甜茶叶为材料，采用水提醇沉法提取了多糖成分，研究了其组成、体外抗氧化及体内毒性作用。采用苯酚-硫酸法和衍生化高效液相色谱法分别测定了总糖质量分数和单糖组成，并结合傅里叶变换红外光谱进一步证实了多糖组分。结果表明，在甜茶多糖中，总糖质量分数为70.2%，主要由甘露糖、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖、岩藻糖6 种单糖组成，其物质的量比为1.17∶21.79∶3.54∶1.00∶1.33∶2.86。体外抗氧化实验结果表明，甜茶多糖作为天然活性成分，具有一定的抗氧化能力，其中DPPH自由基清除能力相对较强。以斑马鱼为模型生物的体内毒性实验表明，甜茶多糖未表现出对斑马鱼胚胎和幼鱼的致畸和致死作用，证明其具有安全、低毒的特点，本实验为甜茶多糖的进一步开发和应用提供了依据。

本文《甜茶叶多糖的表征、体外抗氧化活性与体内毒性》来源于《食品科学》2020年41卷15期201-207页，作者：教小磐，刘云。DOI:10.7506/spkx1002-6630-20190511-114。点击下阅读原文即可查看文章相关信息。

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