Exp Hematol Oncol | 张铮/黄亮/Vijay Bhoj团队开发双功能BiTE细胞外囊泡治疗B细胞恶性肿瘤

嵌合抗原受体T细胞（CAR-T）和双特异性T细胞衔接器（BiTE）显著改善了复发或难治性B细胞恶性肿瘤的治疗结局。然而，CAR-T细胞治疗存在制备复杂、成本较高等问题；以blinatumomab为代表的游离BiTE分子体内半衰期较短，通常需要持续静脉输注。此外，免疫抑制性肿瘤微环境也会限制T细胞浸润和活化。

近日，中国医学科学院血液病医院、华中科技大学同济医学院附属同济医院及美国宾夕法尼亚大学等单位，在Experimental Hematology & Oncology发表题为 Engineered extracellular vesicles displaying bi-specific T-cell engagers for targeted therapy of B-cell malignancies的研究论文。该研究构建了双功能细胞外囊泡平台BiTEEV@STA。BiTE通常由两个单链可变片段组成，一端识别肿瘤细胞表面抗原，另一端结合T细胞表面的CD3分子，从而建立肿瘤细胞与T细胞之间的连接，诱导T细胞活化并清除靶细胞。

研究团队将CD19×CD3 BiTE通过跨膜结构锚定于细胞外囊泡表面，构建BiTE EV。该设计使囊泡表面可同时展示多个BiTE分子，兼具识别CD19⁺肿瘤细胞和募集CD3⁺ T细胞的能力，从而促进抗原依赖性的T细胞活化与肿瘤细胞杀伤。

图1：BiTE EV@STA通过CD19×CD3双抗重定向T细胞，并递送STING激动剂激活树突状细胞和巨噬细胞，协同增强抗肿瘤免疫。

透射电子显微镜及纳米颗粒跟踪分析显示，工程化BiTE EV保持了完整的囊泡结构和相对均一的粒径。流式细胞术和共聚焦成像进一步证实，BiTE EV能够同时结合CD19和CD3，并优先与CD19⁺肿瘤细胞及T细胞发生相互作用。

药代动力学研究显示，BiTE EV在小鼠体内的消除半衰期约为10.7小时，明显长于游离BiTE的3.9小时，提示细胞外囊泡表面展示能够改善BiTE分子的体内暴露时间。

进一步研究显示，BiTE EV可激活ZAP-70、AKT和ERK等T细胞受体下游信号，促进CD69和CD25表达，并诱导IFN-γ和TNF-α释放。在体外共培养体系中，BiTE EV能够有效清除CD19⁺ Raji和Nalm6肿瘤细胞，而对CD19敲除细胞的杀伤作用明显下降，证明其效应具有抗原依赖性。

在Nalm6白血病异种移植模型中，BiTE EV显著抑制肿瘤进展并延长小鼠生存期。较高频率给药组的肿瘤负荷较对照组下降超过90%，并伴随外周血T细胞扩增以及骨髓和脾脏中T细胞活化增强。

为进一步克服免疫抑制性肿瘤微环境，研究团队通过电穿孔将STING激动剂ADU-S100负载至BiTE EV内部，构建BiTE EV@STA。STING激活能够促进I型干扰素和趋化因子产生，推动树突状细胞成熟、巨噬细胞活化及T细胞向肿瘤组织浸润。

体外实验显示，负载STING激动剂的细胞外囊泡能够激活IRF3信号，上调IFN-β和CXCL10，并促进树突状细胞和巨噬细胞表达共刺激分子CD86。

在Raji淋巴瘤模型中，BiTE EV@STA表现出优于BiTE EV或游离STING激动剂的抗肿瘤效果，并显著增加肿瘤内CD8⁺ T细胞浸润。转录组及免疫学分析显示，该治疗增强了抗原呈递和I型干扰素相关通路，同时促进CD86⁺巨噬细胞及成熟树突状细胞增加。

安全性评价显示，在本研究采用的剂量和观察时间内，BiTE EV及BiTE EV@STA未引起明显体重下降、肝肾功能异常或主要脏器组织损伤。

综上，该研究开发了一种兼具表面蛋白展示和内部药物负载能力的双功能细胞外囊泡平台。BiTE EV通过CD19×CD3双抗募集并激活细胞毒性T细胞，STING激动剂则进一步促进树突状细胞成熟、巨噬细胞活化和CD8⁺ T细胞肿瘤浸润，从而实现先天免疫与适应性免疫的协同激活。

该平台目前仍处于临床前研究阶段，但为B细胞恶性肿瘤的组合免疫治疗提供了新的思路，也展现了工程化细胞外囊泡作为模块化免疫治疗平台的应用潜力。

杨秀秀、许谦和王珏为本文共同第一作者，张铮、黄亮和Vijay G. Bhoj为共同通讯作者。

原文链接：https://link.springer.com/article/10.1186/s40164-026-00749-5

制版人：十一

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