外泌体研究火了这么多年,方法也是五花八门:超速离心、尺寸排阻、沉淀法、磁珠法、柱纯法…… 打开文献,各家都言之凿凿,看得人心潮澎湃,仿佛哪种都能「打通任督二脉」。
但冷静下来想一想:文献里最好、最纯的方法,就一定适合你吗?答案往往是否定的。
血浆样本少时,磁珠法比超离、尺寸排阻更划算;
细胞上清如果追求「多快好省」,沉淀法比超离更合适,有条件的话,专用无血清培养基还能从源头减少干扰;
体液样本本就稀少,得率太低的方法可能根本推进不下去;
动物组织和植物样本,超离更是无法直接下手,必须先经过针对性的预处理。
Umibio 针对不同样本类型,准备了一系列外泌体提取纯化试剂盒试用装,名额不限制,覆盖细胞上清、血清/血浆、尿液、乳液、组织乃至细菌膜囊泡!不管你手上是哪种样本,先领一份试用装,用自己的样本亲自验一验,比看多少篇文献都靠谱。
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那么,不同方法之间有什么区别呢?如何计算综合成本呢?
不同提取方法的得率与适用场景
综合成本并非单指试剂盒价格,而是耗材成本、人工成本与培养/样本成本之和。方法得率越低,意味着需投入更多样本、进行更多次实验才能获得等量外泌体,这部分隐性成本往往高于试剂本身。以下得率数据基于实验室长期积累的实验数据及大量客户反馈总结而成:
PEG 沉淀法:得率约 40%,适合样本量少、原始样本干净、想控制成本的场景;
预处理 + PEG 沉淀 + EPF 柱:得率约 30%,综合性能均衡,性价比高,适合大多数实验室的常规需求;
尺寸排阻(SEC):得率约 60%,蛋白去除率高达 94%,更适合常规拍电镜;但要求起始样本浓度在 3 μg/μL 以上,浓度不够外泌体容易「消失」在柱子里;
超滤(UF):得率 40%~60%,浓缩会通过膜吸附损失大量外泌体,纯度相对较低;
柱纯法:得率 30%~40%,通常需要后续再浓缩一步,适合没有超速离心机的实验室;
磁珠法:得率 30%~40%,基于电荷原理捕获外泌体。
植物细胞外囊泡(PENs),前处理才是第一道关卡
比起细胞上清、体液这类「液体样本」,植物和大型真菌的囊泡提取难度要更高一截。超速离心根本无法直接上手,必须先完成前处理,把植物组织变成能进试剂盒的汁液。
针对这个问题,我们把常见功效性植物按照果实、花/叶、根茎、干品植物(花/根茎/种子)四大类,再加上大型真菌,分成五类,整理出了详细的前处理方案:
出汁率(每千克原料出汁量)= 汁液体积(mL)÷ 原材料质量(kg)
① 果实类(如柠檬):出汁率 300~400 mL / kg,推荐手摇式碾磨榨汁机。以 70 g 去皮果实为例,榨汁去杂后得到 20~30 mL 汁液,前处理浓缩 50 倍,最终获得约 400 μL 植物囊泡。薄皮果实洗净切块直接榨汁;厚皮果实(如柠檬)需去皮切小块再榨汁。
② 花/叶类(如玫瑰、芦荟):出汁率 200~300 mL/kg,推荐电动碾磨榨汁机。100 g 花/叶榨汁后得到 20~30 mL 汁液,同样浓缩 50 倍得到约 400 μL 囊泡。花需去除花托、花萼、花蕊,只留花瓣;叶片需去除蔫掉部分和茎,只留待提取的叶。
③ 根茎类(如葛根、三七、麦冬):出汁率 150~200 mL / kg,推荐电动碾磨榨汁机。150 g 根茎处理后得到 20~30 mL 汁液,浓缩 50 倍得约 400 μL 囊泡。硬皮根茎(如葛根)需削皮切小块,少量多次榨汁;薄皮根茎(如麦冬)洗净去泥后直接切块榨汁。汁液黏稠(如山药、石斛)时可用适量 PBS 辅助溶解。
④ 干品植物类(如金银花、红景天、火麻仁):优先选择可直接泡发、无需二次处理的干品,推荐旋转刀片榨汁机。10 g 干品用 PBS 泡发后,加 20~30 mL 泡发水榨汁,浓缩 50 倍得约 400 μL 囊泡。大块干品需先撕 / 剪成小块再泡发。
⑤ 大型真菌类(如灵芝):推荐电动碾磨榨汁机。20 g 真菌洗净切小片,榨汁打碎取渣后加 40~50 mL PBS,前处理浓缩 100 倍,得约 400 μL 囊泡。真菌几乎不产生汁液,需通过磨碎 + 加 PBS 的方式来完成后续处理。
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Umibio 成立于 2015 年,专注外泌体领域十余年,客户文献已累计 800 余篇,产品体系覆盖提取、纯化、培养、检测全流程。我们的成长,很大程度上就是靠客户「试出来」的信任积累起来的 —— 即将开始植物囊泡研究的你,不用自己摸黑试错,扫码申请试用装,还能获得更深入的技术讲解和一对一沟通。
内容策划:沈佳钰
内容审核:吴军
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