IF=81.2！广西医科大学卢小玲团队打造新型T细胞衔接器，可精准识别胞内肿瘤抗原

癌细胞表面的可靶向蛋白数量有限，超过七成的肿瘤特异性抗原存在于细胞内部，这使传统T细胞衔接器（BiTE）抗体药物常常无法送达肿瘤内部，加上常规BiTE分子本身存在结构不稳定和易聚集的生产难题，其临床应用受到不小制约。2026年6月25日，广西医科大学卢小玲教授团队在学术期刊《Signal Transduction and Targeted Therapy》上发表了一项题为“TCR-mimic bispecific nanobody-based T cell engager targeting intracellular tumor antigens for cancer immunotherapy”的研究成果，他们成功开发出一个名为TCRm Bi-NbTE的双特异性纳米抗体平台，该分子通过结合T细胞上的CD3ε与肿瘤细胞表面的肽-MHC复合物，将免疫药物有效导向细胞内部的肿瘤靶标。

这个TCRm Bi-NbTE分子本质上是由两个纳米抗体串联而成，其中一个负责搜寻由MHC-I分子呈递的胞内抗原片段，另一个则负责激活T细胞。研究团队利用此前筛选到的、能够特异性识别HLA-A2/WT1或HLA-A2/GPC3复合物的TCR模拟纳米抗体，通过柔性连接肽将它们与抗CD3ε纳米抗体连接在一起，整个构建过程在大肠杆菌表达系统中完成。纯化后蛋白的纯度经鉴定超过了百分之九十，产量也达到了后续实验的要求，生物层干涉技术的测定结果显示，该分子对CD3ε的平衡解离常数达到了10⁻⁸摩尔/升量级，对相应pMHC复合物的亲和力则在10⁻⁷摩尔/升水平。夹心酶联免疫吸附实验的结果证实同一TCRm Bi-NbTE分子能够同时捕获CD3ε和pMHC两种抗原且互不干扰，这意味着分子两个结合端能够各司其职地为后续桥接T细胞与肿瘤细胞做准备。

这种新设计的分子在特异性识别方面的表现相当严格，流式细胞术的检测结果清晰地显示，TCRm Bi-NbTE能够精准地结合在HLA-A2阳性且表达WT1或GPC3抗原的肿瘤细胞系上，或者结合那些人为负载了对应特征肽段的T2细胞。相反地，对于同样带有HLA-A2但不表达这些抗原的K562、Huh-7、SW480细胞，以及负载了无关肽段的T2细胞，该分子几乎没有表现出任何结合能力。研究团队还利用算法预测了人源蛋白质组中可能发生交叉反应的肽段并逐一验证，结果均未检测到阳性信号，进一步开展的丙氨酸扫描突变实验则精确锁定了几个关键接触残基——WT1肽段上的精氨酸1、天冬酰胺5、丙氨酸6和亮氨酸9，以及GPC3肽段上的缬氨酸2、甘氨酸3、苯丙氨酸5和缬氨酸9，这些位点的单氨基酸替换会显著削弱甚至消除结合。

在确认靶向精度后，研究团队评估了分子调动T细胞实施杀伤的能力，他们将TCRm Bi-NbTE与T细胞及靶肿瘤细胞共同培养后，T细胞表面的早期激活标志CD25和CD69均显著上调，脱颗粒标志CD107a的表达也同步增加，表明T细胞正在准备释放杀伤性颗粒。CFSE标记的实验结果证实T细胞在共培养体系中发生了明显的分裂增殖，而且所有这些活化与增殖反应都严格依赖于靶细胞表面存在对应的pMHC复合物。值得注意的是，在持续刺激下部分T细胞向中央记忆型T细胞分化，这类CD45RA⁻CCR7⁺细胞亚群比例的增加暗示着TCRm Bi-NbTE诱导的T细胞可能具备更长的体内存活时间和更强的再次应答潜力。伴随T细胞活化过程的是大量IL-2和干扰素-γ的释放，酶联免疫斑点实验也数出了更多的干扰素-γ阳性T细胞克隆，体外细胞毒性实验则表明TCRm Bi-NbTE在极低浓度下就能介导T细胞高效杀伤pMHC阳性的靶细胞，杀伤效果随剂量增加而增强，而对抗原阴性的各株细胞几乎未造成明显裂解。

在动物体内验证阶段，研究团队采用了免疫缺陷小鼠皮下荷瘤模型并输注人外周血单核细胞，连续六天给予TCRm Bi-NbTE治疗后，HepG2-Luc和OVCAR3两种移植瘤的生长均被显著遏制，小鼠的生存期也得到了明显延长。在更为贴近临床实际的肝癌患者来源异种移植模型中，同样的治疗效果依然成立，治疗期间小鼠的体重、血清转氨酶、炎性因子等安全性指标均未出现异常波动。对肿瘤组织的进一步分析显示，治疗组肿瘤内的凋亡细胞显著增多而Ki-67阳性增殖细胞减少，瘤内和脾脏中浸润的CD3⁺T细胞数量也明显高于对照组。转录组测序的结果则揭示了治疗组肿瘤组织中一系列与T细胞活化、增殖、细胞毒性相关基因的表达上调，包括CD3E、CD8A、颗粒酶B、穿孔素和FAS配体等，同时PDCD1和CTLA4等耗竭相关标志也有适度增加，这与持续免疫激活的转录特征相吻合，基因本体功能富集分析也证实了T细胞相关生物学通路的显著富集。这项研究构建的TCRm Bi-NbTE平台以其模块化设计和纳米抗体自身的稳定性优势，为实现针对不同胞内肿瘤抗原的快速适配和规模化生产提供了可能，也为那些传统抗体药物束手无策的靶点开辟了新的免疫治疗路径。

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