国产与进口转染试剂使用体会

细胞转染实验是分子生物学研究中的一项常规实验，操作流程多且细节要求高，转染难度大。转染试剂作为实验的核心关键耗材，对于保障转染实验的成功特别重要。当前市场中，比较热门的国产转染试剂就是Rfect V2 siRNA转染试剂，由国内转染试剂领域龙头企业百代生物所研发；进口品牌中，要数lipofectamine3000最为畅销，由国际生物试剂巨头赛默飞研发，我们实验室这两款试剂都用过，在这里给大家分享一些作为实验者的购买和使用体验。

一、售前方面

买RFect V2转染试剂之前，由于我们不了解这款试剂的实验性能，就先找百代生物的技术咨询了一堆问题，没想到人家特别热情，回答得还巨细致！比如我们实验室常做Hela、RAW264.7这些细胞，一开始根本不知道该选哪款siRNA转染试剂，百代的技术都挨个给我们讲清楚了，Hela这种贴壁细胞直接用RFect V2 就行，RAW264.7这种半贴壁半悬浮的，选RFectSPV2悬浮细胞专用的更合适。更贴心的是，针对每种细胞，人家都有对应的SCI论文，还直接下载好发给我们参考，这一点真的太用心了。除了这个，我们还问了好多转染实操的问题，比如转染时细胞密度多少合适，技术明确说40%左右就可以，还贴心提醒我们根据细胞增殖快慢调整铺板的细胞数。就连怎么调整细胞状态这种细节，人家也特别有经验，告诉我们要用3-10代的细胞，一定要注意避免污染。甚至不同孔板该用多少试剂、多少siRNA，都讲得明明白白，听完之后心里特别有底，特别安心。哪怕像实验对照怎么设置、后续啥时候进行检测、怎么检测这种问题，人家也是立马解答还会把背后的原理给我们普及一下，真的很赞！

赛默飞的试剂我们也问过，但感觉他家客服只会讲一些理论，具体到实际操作的问题，比如转染时的细胞密度是多少啊、细胞状态怎么调整、转染对照怎么设置啊，就比较含糊其辞，可能是他家技术并没有真正做过转染实验，不是很熟悉的样子。还有像lipofectamine3000可以进行siRNA转染，但是说明书没写，我们问技术怎么做，技术就说直接参考siRNA合成说明书。我们还听说lipofectamine3000毒性比较大，问有没有改进的方法，技术对具体操作也说不出个所以然，就只建议我们去参考一下别人的论文。只能说问了一圈，多少有点收获，但实际能用的干货真没多少。

二、售后方面

我们用RFect V2进行实验时，不管在操作过程中遇到啥技术问题，打个百代生物的一对一指导电话，或者在线实时咨询，都能很快得到解答，特别方便。就连转染后检测实验结果，比如荧光显微镜该怎么观察、基因沉默效率该怎么算，他们技术团队也会一对一专业指导，连数据计算方法、公式怎么用都讲得明明白白，跟着学下来，慢慢就把相关技术摸透了。对于做出来的一些不够理想的实验结果，把我们的具体操作步骤、实际拿到的数据发给他们，技术就会进行分析，精准找到问题出在哪，再给针对性的优化方案，帮我们把问题赶紧解决掉。万一实验实在卡壳，怎么都达不到预期效果，他们还能提供实验代做的服务，全程帮着优化方案，等实验做成功了，再把最优的实验条件完完整整告诉我们，保证我们自己做的时候也能顺顺利利的把研究目标达成，这一点真的太戳实验人的心窝子了！

使用lipofectamine3000时也会遇到一些不太明白的地方，像一些基础转染操作的通用问题确实能够从技术那边得到解答，但也就仅限于这些方面，要是涉及到跟结果相关的实际问题比如怎么进行细胞转染效果的荧光观察、明暗场怎么转换、基因沉默效率怎么计算啦，技术支持就语焉不详，讲不清楚。如果要问一些更复杂的问题，比如怎么长时间维持siRNA的转染效果、如何在siRNA转染过程中同时加药处理，那技术就完全讲不清楚了。整个交流过程呢，也不是很顺畅，我们只能通过电话或邮件联系技术支持，还没法保证每次对接的是同一个技术，好多实验细节得翻来覆去说，特别麻烦，根本没有全程一对一的指导。

三、使用体验

作为实验者，Rfect V2和lipofectamine3000使用下来有以下几方面的体会比较深刻，跟大家分享一下：

首先就是siRNA转染效率，Rfect V2作为一款专业进行siRNA转染的试剂，无论是转染阳性率还是基因沉默效率都是很不错的，基本上我们转Hela细胞两个转染效率指标都能达到90%以上，百代生物的技术也曾为我们介绍过它的特点，由于RFect V2采用的是可降解生物纳米材料，在进行siRNA转染时，区别于传统阳离子脂质体或PEI等转染试剂，能将siRNA转染进细胞后自身迅速降解，因此siRNA释放地更加充分，就有更好的基因沉默效果。而lipofectamine3000或许是更适合大分子质粒转染的原因，因此本身所带有的强电荷虽然可以紧密吸附siRNA，转染阳性率还可以（Hela细胞siRNA转染阳性率80%以上），但是转进细胞后却难以充分释放siRNA导致基因沉默效率并不高，仅有百分之六七十。

其次在细胞毒性方面，两款试剂的差异就更为明显了。或许是Rfect V2是用可降解生物纳米材料，在转染后Hela细胞死亡率大概只有5%左右，和我们自己做的空白对照组的细胞死亡率基本一致，细胞活力非常好，而lipofectamine3000的毒性虽早有耳闻，我们也提前查了些资料，做了一些改进操作，比如转染前换为无血清培养基，转染后6小时再换新鲜培养基等，但Hela细胞仍死亡了20%以上。

还有一方面，也是很多刚接触转染实验的研究者可能会在意的一点就是操作简便性的问题，那可以很明确的说，lipofectamine3000操作会稍微繁琐一些，除了购买转染试剂外，还需要额外购买Opti-MEM减血清培养基才行，还有上面所提到的换液操作最好也要做起来，否则细胞死亡率可能还要更高。相比之下，你要选择Rfect V2的话，那既不需要买特殊培养基，也不需要换液。

以上就是我们使用两款转染试剂的一些体会，希望能给到即将进行转染实验的小伙伴们一点参考。如果对siRNA转染实验的要求较高、对转染结果的准确性要求较高的话，建议还是选择RFect V2，因为它的细胞毒性比较低，不会对转染结果造成影响；如果是还不太了解细胞转染或者想获得更多实验方面指导的研究者，最好是选择像百代生物这样的国产转染试剂品牌，可以给到更加精准细致的售前售后服务；如果是对进口试剂比较信任，对细胞毒性也不是很在意的研究者，那就可以选用lipofectamine3000这类试剂。