Cal-520-Biocytin Conjugate：复合型荧光化学工具的制备方法

名称：Cal-520-Biocytin Conjugate
一、基本描述
Cal-520-Biocytin Conjugate 是一种将高灵敏度钙离子荧光探针 Cal-520 与 Biocytin（生物素-L-赖氨酰胺） 通过特定化学键方式偶联的复合型荧光化学工具。Cal-520 是基于 BAPTA 结构改造的新一代绿色荧光 Ca²⁺ 指示剂，其优势在于高信噪比、优良的 Ca²⁺ 亲和力与较低背景荧光；而 Biocytin 则是生物素体系中常用的增强型配基，其链长更适中，能更好地参与 生物素-链霉亲和素（Biotin-Streptavidin） 体系的高亲和力识别。
两者结合后形成的 Cal-520-Biocytin Conjugate 兼具 钙离子荧光探针 与 生物素标记分子 的双重属性，可通过链霉亲和素固定、富集、靶向递送或组织定位，从而在细胞成像、神经电生理、钙信号研究以及免疫定位分析中发挥优势。其荧光激发/发射波长典型为 约 492/514 nm，具备明亮绿色荧光输出。
该探针通常以 AM 酯（乙酰氧甲酯）形式提供，使其能轻松穿透细胞膜，进入细胞后被细胞内酯酶切割成不可外流的活性 Ca²⁺ 指示剂，实现稳定 Ca²⁺ 成像。

二、制备方法
Cal-520-Biocytin Conjugate 的制备一般包含以下典型步骤，涉及对 Ca²⁺ 荧光团的活化、与 Biocytin 的耦合以及保护基控制：
Cal-520 荧光团的活化
Cal-520 通常以含有羧基的活性形式提供，通过 DCC、EDC/NHS 等碳二亚胺体系将其羧基转化为 NHS 酯或类似活性酯，使其便于与胺基发生酰胺键偶联。
Biocytin（含游离氨基）的耦合
Biocytin 分子末端具有一级氨基，可与上述 Cal-520-NHS 酯发生核苷酸进攻生成稳定的酰胺键。由于 Biocytin 链长较长且空间开放，耦合效率通常较高。
保护基去除与纯化
若 Cal-520 处于 AM 保护状态（例如 Cal-520-AM），则在合成过程中需避免碱水解，并在完成耦合后进行柱层析（HPLC）提纯，使最终产物保持较高纯度。
成盐与冻干
纯化后的探针可转换为适合储存的 TFA 盐或其他酸盐形式，随后进行冻干，得到稳定粉末。
虽然生物素的引入会略微增加分子量，但整体结构仍保持较好的细胞渗透性（若为 AM 酯形式），并可在细胞内解酯后定位于胞质以响应钙信号。
用途：科研
状态：固体/粉末/溶液
保存：冷藏
供应：西安齐岳生物科技有限公司
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