AF405 NHS，AF405活性酯试剂的典型实验方案

【核心特性】
中文名：AF405琥珀酰亚胺酯，AF405活性酯
英文名：Alexa Fluor 405 NHS，AF405 NHS，Alexa Fluor 405 N-Hydroxysuccinimide Ester，AF405 N-Hydroxysuccinimide Ester
荧光基团标记：Alexa Fluor 405
反应性基团：NHS Ester
反应性：蛋白和配体、胺修饰的寡核苷酸上的伯胺
激发波长：400 nm
发射波长：424 nm
消光系数：35,000 cm-1M-1
光谱类似染料：Pacific Blue
分子式：C46H69N5O15S3
分子量：1028.3
Alexa Fluor 405 NHS
纯度标准：≥95%
包装规格：10mg，25mg，50mg（灵活性，可按需定制）
溶解条件：溶于DMSO(二甲亚砜)等部分有机溶剂
稳定性：储存在干燥、阴凉处，通常需要在-20°C下储存
【光学特性与标记优势】
明亮的蓝色荧光：其激发峰位于约400-401 nm，发射峰位于约421-424 nm，非常适合与405 nm紫激光器配合使用。
优异的光稳定性：标记后的偶联物在成像和流式细胞分析中能产生稳定的信号，并且比光谱相似的其他荧光基团偶联物更亮。
良好的水溶性与pH不敏感性：在pH 4到pH 10的范围内，其荧光性能基本不受pH值影响，适用条件更广。

【反应特性与标记对象】
特异性标记伯胺：其NHS酯（琥珀酰亚胺酯）基团可与蛋白质、抗体、肽以及胺修饰的寡核苷酸上的伯胺（-NH₂）发生反应，形成稳定的酰胺键。
高效的共价偶联：通过该反应，Alexa Fluor 405染料能共价连接到目标分子上，实现永久性标记。
【典型实验方案】
反应条件：建议将染料溶于高质量的无水DMSO或DMF中，然后在pH 8.3左右的0.1–0.2 M碳酸氢钠缓冲液中，于室温下与目标分子反应约1小时。蛋白浓度建议不低于2 mg/mL以获得最佳结果。
标记程度优化：可通过调整反应性试剂与蛋白的摩尔比，来获得不同标记程度的偶联物。
纯化步骤：反应后，通常使用凝胶过滤柱（如Sephadex G-25）或透析等方法，将标记好的抗体或蛋白与未反应的游离染料分离。
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试剂仅限用于科研实验用于科学研究或者工业应用等目的，不可用于药用或食用！！
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