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产品名称:Biotin-PEG4-tyramine,生物素-PEG4-酪胺的反应机制与条件优化
1. 反应机制与条件优化
生物素-链霉亲和素结合:
在pH 7.2-7.4的PBS缓冲液中,生物素与链霉亲和素快速结合,形成稳定复合物,用于抗体/核酸标记、蛋白质固定等。
酪胺的酶促反应:
TSA技术:HRP催化酪胺与H₂O₂反应生成自由基,共价结合蛋白质/核酸,实现局部信号放大(如免疫组化、原位杂交)。
条件优化:pH 7.5-8.5、室温避光反应30-60分钟;避免含伯胺的Tris缓冲液;H₂O₂浓度控制在0.01%-0.1%以防止过度氧化。
纯化与储存:
反应后通过Sephadex G-25凝胶过滤或透析去除未反应试剂;固体粉末需-20℃避光干燥保存,溶液现配现用,避免反复冻融。
2. 应用场景与优势
生物成像与检测:
免疫组化/荧光成像:标记抗体用于细胞/组织切片的高灵敏度检测(如肿瘤标志物、突触蛋白),适配共聚焦显微镜、STORM/PALM超分辨成像。
流式细胞术:标记细胞表面蛋白,实现定量分析与多靶标共定位。
Western Blot/ELISA:通过链霉亲和素-HRP增强化学发光信号,提升检测特异性。
分子标记与功能化:
蛋白质/核酸标记:用于蛋白质芯片、FISH探针、纳米材料(如脂质体、金纳米颗粒)的功能化。
药物递送:构建靶向药物载体,结合生物素-亲和素系统实现精准递送。
优势特点:
高特异性:生物素-链霉亲和素系统确保低背景干扰。
信号放大:TSA技术显著提高低丰度蛋白检测能力。
多功能性:支持多种生物分子标记及检测技术,兼容活细胞实验。
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